CRISPR (Clustered regularly interspaced short palindromic repeats) គឺជាបច្ចេកទេសកែសម្រួលហ្សែនជំនាន់ទីបី ដែលបានធ្វើបដិវត្តន៍ពិភពលោកជាមួយនឹងលទ្ធផលខ្ពស់របស់វា។ វាត្រូវបានគេប្រើដើម្បីព្យាបាលជំងឺជីវសាស្រ្ត និងការឆ្លងមេរោគផ្សេងៗ។ បាក់តេរីផ្សេងៗ និងប្រូការីយ៉ូតផ្សេងទៀត (ដូចជា archaea) ក៏មានប្រព័ន្ធ CRISPR/Cas9 ដើម្បីការពារប្រឆាំងនឹងហ្វាស។ វាត្រូវបានរាយការណ៍ថា យុទ្ធសាស្ត្រដែលមានមូលដ្ឋានលើ CRISPR/Cas9 អាចរារាំងការលូតលាស់ និងវឌ្ឍនភាពនៃជំងឺមហារីកសុដន់បីអវិជ្ជមាន (TNBC) ដោយការកំណត់គោលដៅហ្សែនធន់ទ្រាំដែលអាចផ្លាស់ប្តូរ ការចម្លង និងបទប្បញ្ញត្តិអេពីហ្សែន។ អន្តរាគមន៍ព្យាបាលទាំងនេះអាចជួយដោះស្រាយបញ្ហាប្រឈមដូចជាភាពធន់នឹងថ្នាំដែលសង្កេតឃើញសូម្បីតែនៅក្នុង TNBC។ បច្ចុប្បន្ននេះ វិធីសាស្រ្តផ្សេងៗត្រូវបានប្រើដើម្បីបញ្ជូន CRISPR/Cas9 ទៅកាន់កោសិកាគោលដៅ ដូចជារូបវន្ត (មីក្រូចាក់ អេឡិចត្រូប៉ូរ៉ាស្យុង និងអ៊ីដ្រូឌីណាមិក) វីរុស (វីរុសដែលភ្ជាប់អាដេណូ និងលេនទីវីរុស) និងមិនមែនវីរុស (លីប៉ូសូម និងណាណូភាគល្អិតខ្លាញ់)។ ទោះបីជាគំរូផ្សេងៗត្រូវបានបង្កើតឡើងដើម្បីសិក្សាពីមូលហេតុម៉ូលេគុលនៃ TNBC ក៏ដោយ ក៏កង្វះវិធីសាស្រ្តដែលងាយរងគ្រោះ និងផ្តោតលើការផ្តល់ឧបករណ៍កែសម្រួលហ្សែននៅក្នុង vivo កំណត់ការអនុវត្តគ្លីនិករបស់ពួកគេ។ សរុបមក ការពិនិត្យឡើងវិញនេះពិនិត្យយ៉ាងទូលំទូលាយអំពីវឌ្ឍនភាព បញ្ហាប្រឈម ដែនកំណត់ និងការរំពឹងទុកនៃការព្យាបាល CRISPR/Cas9 សម្រាប់ TNBC ដោយផ្អែកលើភស្តុតាងដែលមានស្រាប់។ យើងក៏បានបញ្ជាក់ពីរបៀបដែលការរួមបញ្ចូលគ្នានៃបញ្ញាសិប្បនិម្មិត និងការរៀនម៉ាស៊ីនអាចធ្វើអោយប្រសើរឡើងនូវយុទ្ធសាស្ត្រ CRISPR/Cas9 ក្នុងការព្យាបាល TNBC។
ជំងឺមហារីកត្រូវបានកំណត់លក្ខណៈដោយការបែងចែកកោសិកាដែលមិនអាចគ្រប់គ្រងបាន ការរំខានដល់ចំណុចត្រួតពិនិត្យវដ្តកោសិកា និងការផ្លាស់ប្តូរនៅក្នុងហ្សែនទប់ស្កាត់ដុំសាច់ (TSGs) (Matthews et al., 2022)។ ក្នុងចំណោមប្រភេទផ្សេងៗគ្នានៃជំងឺមហារីក ជំងឺមហារីកសុដន់គឺជាប្រភេទជំងឺមហារីកទូទៅបំផុតចំពោះស្ត្រី និងមានអត្រាមរណភាពខ្ពស់ទូទាំងពិភពលោក (Waks and Winer, 2019)។ ជំងឺមហារីកសុដន់គឺជាជំងឺចម្រុះដែលមានលក្ខណៈចម្រុះ ដូចជាលក្ខណៈពិសេសនៃជាលិកាវិទ្យា និងជីវសាស្រ្ត ការបង្ហាញគ្លីនិក និងឥរិយាបថ និងការឆ្លើយតបទៅនឹងការព្យាបាល (Weigelt et al., 2010)។ ការចាត់ថ្នាក់ជំងឺមហារីកសុដន់ផ្តល់នូវការយល់ដឹងច្បាស់លាស់សម្រាប់ការធ្វើរោគវិនិច្ឆ័យជំងឺមហារីកសុដន់ និងការព្យាករណ៍ដុំសាច់។ ការប្រើប្រាស់ជីវសញ្ញាណទូទៅ និងលក្ខណៈពិសេសនៃគ្លីនិករោគសាស្ត្រ គឺជាលក្ខណៈវិនិច្ឆ័យចម្បងសម្រាប់ការចាត់ថ្នាក់នៃជំងឺមហារីកសុដន់ (Tsang and Tse, 2019)។ ការព្យាករណ៍ និងការឆ្លើយតបទៅនឹងការព្យាបាលជំងឺមហារីកសុដន់ត្រូវបានជះឥទ្ធិពលដោយកត្តាជាច្រើន រួមទាំងវត្តមាននៃអ្នកទទួលអ៊ឹស្ត្រូសែន (ER) អ្នកទទួលប្រូហ្សេស្តេរ៉ូន (PR) អ្នកទទួលកត្តាលូតលាស់ស្បែករបស់មនុស្ស 2 (HER2/neu) និងកម្រិតជាលិកាវិទ្យា ប្រភេទដុំសាច់ និងកម្រិត។ ទំហំ និងការរាលដាលដល់កូនកណ្តុរ (Al-Tubaiti, 2020)។ អនុប្រភេទម៉ូលេគុលខាងក្នុងចំនួនប្រាំនៃជំងឺមហារីកសុដន់ត្រូវបានកំណត់អត្តសញ្ញាណ រួមមាន luminal A, luminal B, HER2-enriched, basal-like និង claudin-low (Prat et al., 2015)។ TNBC គឺជាអនុប្រភេទម៉ូលេគុលនៃជំងឺមហារីកដែលមិនបង្ហាញពី ER, PR និង HER2 ទាំងអស់ (Yin et al., 2020)។ លក្ខណៈពិសេសខាងរោគសាស្ត្រទាំងនេះត្រូវបានផ្សារភ្ជាប់ជាមួយ TNBC ដែលបញ្ជាក់ពីការវិវត្តយ៉ាងឆាប់រហ័សរបស់វា និងមានលក្ខណៈឈ្លានពានជាងជំងឺមហារីកសុដន់ប្រភេទផ្សេងទៀត (Feng et al., 2018)។ លើសពីនេះ Peru et al (2000) បានប្រើបច្ចេកវិទ្យា microarray ដើម្បីចាត់ថ្នាក់ឡើងវិញនូវជំងឺមហារីកសុដន់ និងកំណត់អត្តសញ្ញាណអនុប្រភេទខាងក្នុងចំនួនប្រាំនៃជំងឺមហារីកសុដន់ (Cadenas, 2012)។ ជំងឺមហារីកសុដន់ Basal-like គឺជាអនុប្រភេទនៃជំងឺមហារីកសុដន់ដែលមាន phenotype អវិជ្ជមានបីដង និងត្រូវបានផ្សារភ្ជាប់ជាមួយនឹងការវិវត្តយ៉ាងឆាប់រហ័ស។ គួរកត់សម្គាល់ថា ជំងឺមហារីកសុដន់ដែលមានរាងដូចបាតទាំងអស់ត្រូវបានគេធ្វើរោគវិនិច្ឆ័យខុសជាទូទៅថាជា TNBC ប៉ុន្តែមានតែ 77% ប៉ុណ្ណោះដែលជា TNBC; ផ្ទុយទៅវិញ 71–91% នៃ TNBC មានរាងដូចបាត ដែលបង្ហាញថា ជំងឺមហារីកសុដន់ទាំងពីរប្រភេទនេះត្រួតស៊ីគ្នា និងតំណាងឱ្យចំណាត់ថ្នាក់ផ្សេងៗគ្នា (Wang D.-Y. et al., 2019)។ នេះបង្កើតតម្រូវការដើម្បីកំណត់លក្ខណៈនៃភាពមិនដូចគ្នានៃ TNBC ដើម្បីបញ្ជាក់ពីការព្យាករណ៍ និងកំណត់ការឆ្លើយតបដែលអាចកើតមានចំពោះការព្យាបាលបច្ចុប្បន្ន និងអនាគត។ លើសពីនេះ TNBC មានចំនួន 15–20% នៃករណីមហារីកសុដន់ទាំងអស់ ហើយវាកើតមានច្រើនចំពោះស្ត្រីដែលមានអាយុក្រោម 50 ឆ្នាំ។ ការផ្លាស់ប្តូរ BRCA1 ឬ BRCA2 ត្រូវបានរាយការណ៍ថាមានប្រហែល 20% នៃករណី TNBC (Xie et al., 2017; Tzikas et al., 2017)។ , 2020)។ ការសិក្សាក៏បានបង្ហាញផងដែរថា TNBC មានមីក្រូបរិស្ថានភាពស៊ាំដាច់ដោយឡែកមួយដែលរួមមានកម្រិតខ្ពស់នៃកត្តាលូតលាស់នៃសរសៃឈាម endothelial ម៉ាក្រូហ្វាសដែលទាក់ទងនឹងដុំសាច់ (TAMs) កោសិកាឡាំហ្វូស៊ីតជ្រៀតចូលដុំសាច់ (TILs) និងម៉ូលេគុលផ្សេងទៀតដែលពាក់ព័ន្ធនឹងការលូតលាស់ និងការធ្វើចំណាកស្រុករបស់ដុំសាច់។ ដូច្នេះ ការយល់ដឹងអំពីមីក្រូបរិស្ថានរបស់ TNBC គឺមានសារៈសំខាន់សម្រាប់ការព្យាករណ៍ និងការព្យាបាលរបស់វា (Fan and He, 2022)។
ដើម្បីវាយតម្លៃការព្យាករណ៍នៃជំងឺមហារីក TNBC និងធានាបាននូវការព្យាបាលប្រកបដោយប្រសិទ្ធភាព ការធ្វើរោគវិនិច្ឆ័យត្រឹមត្រូវ ដែលភាគច្រើនផ្អែកលើ immunohistochemistry (IHC) ដើម្បីរកឃើញ ER, PR និង HER2 និងការថត mammography ដើម្បីរកឃើញដុំសាច់មហារីកសុដន់ គឺមានសារៈសំខាន់។ ទោះជាយ៉ាងណាក៏ដោយ ការថត mammography មិនអាចពណ៌នាបានគ្រប់គ្រាន់អំពីលក្ខណៈពិសេសនៃដុំសាច់ក្នុងខ្លួនដូចជា necrosis និង fibrosis (Deepak Singh et al., 2021)។ ដោយសារតែការព្យាករណ៍ និងការធ្វើរោគវិនិច្ឆ័យមិនល្អរារាំងវេជ្ជបណ្ឌិតពីការចេញវេជ្ជបញ្ជាថ្នាំត្រឹមត្រូវ (Chaudhary, 2020) យុទ្ធសាស្ត្រផ្សេងៗត្រូវបានប្រើដើម្បីកែលម្អការថែទាំសម្រាប់អ្នកជំងឺដែលមានជំងឺមហារីក TNBC។ បច្ចុប្បន្ននេះ ថ្នាំពីរប្រភេទគឺ doxorubicin និង cyclophosphamide ត្រូវបានប្រើចំពោះអ្នកជំងឺដែលមានជំងឺមហារីក TNBC ហើយបានបង្ហាញលទ្ធផលល្អ។ លើសពីនេះ ថ្នាំ platinum ផ្សេងទៀតត្រូវបានប្រើ ដូចជា carboplatin និង cisplatin (Sikov et al., 2015)។ លើសពីនេះ ថ្នាំ PARP inhibitors ដូចជា Olaparib, Velaparib និង PF-01367338 ត្រូវបានគេប្រើជាថ្នាំគីមីដែលមានសក្តានុពលសម្រាប់ការព្យាបាលជំងឺមហារីក TNBC (Ishino et al., 2018)។ ចាប់តាំងពីផ្លូវសញ្ញា Wnt/b-Catenin, NOTCH និង Hedgehog ត្រូវបានរាយការណ៍ថាពាក់ព័ន្ធនឹងការកើតឡើង និងវឌ្ឍនភាពនៃ TNBC ការកំណត់គោលដៅថ្នាំទៅកាន់ផ្លូវទាំងនេះអាចជាយុទ្ធសាស្ត្រសំខាន់មួយ (Aysola et al., 2013)។ ទោះបីជាការវះកាត់ ការព្យាបាលដោយវិទ្យុសកម្ម និងការព្យាបាលដោយគីមីនៅតែជាការព្យាបាលសំខាន់សម្រាប់ TNBC សព្វថ្ងៃនេះក៏ដោយ វឌ្ឍនភាពគួរឱ្យកត់សម្គាល់ត្រូវបានធ្វើឡើងក្នុងការអភិវឌ្ឍការព្យាបាលថ្មីៗ រួមទាំងការព្យាបាលគោលដៅ ការព្យាបាលដោយប្រព័ន្ធភាពស៊ាំ ឧបករណ៍កែសម្រួលហ្សែន CRISPR ផ្សេងៗដូចជា Cas9n, dCas9, CRISPR/Cas12, ការកែសម្រួលបឋម និងការព្យាបាលហ្សែនគោលដៅ CRISPR/Cas9។ នៅទីនេះយើងនឹងផ្តោតលើឧបករណ៍កែសម្រួលហ្សែន CRISPR ផ្សេងៗដែលប្រើក្នុងការព្យាបាល TNBC។ ក្នុងចំណោមនោះ CRISPR/Cas9 បានទទួលការចាប់អារម្មណ៍យ៉ាងទូលំទូលាយ។
Cas9n ដែលត្រូវបានគេស្គាល់ផងដែរថាជា Cas9 nickase គឺជាបំរែបំរួលវិស្វកម្មហ្សែននៃប្រូតេអ៊ីន Cas9 ដែលទទួលបានពីប្រព័ន្ធកែសម្រួលហ្សែន CRISPR/Cas9 (Gupta et al., 2019)។ នៅក្នុងទម្រង់ដើមរបស់វា ប្រូតេអ៊ីន Cas9 មានដូមេននុយក្លេអាសពីរគឺ RuvC និង HNH ដែលមុខងារចម្បងរបស់វាគឺការកាត់ខ្សែ DNA ទាំងពីរ។ ទោះជាយ៉ាងណាក៏ដោយ នៅក្នុង Cas9n ដូមេននុយក្លេអាសមួយក្នុងចំណោមដូមេននុយក្លេអាសគឺ HNH ត្រូវបានផ្លាស់ប្តូរហ្សែន ហើយក្លាយជាអសកម្ម។ ដូច្នេះ ដូមេន HNH របស់ Cas9n នៅតែមិនដំណើរការ។ មានតែដូមេន RuvC ប៉ុណ្ណោះដែលនៅតែសកម្ម ដែលអនុញ្ញាតឱ្យ Cas9n កាត់ ឬបង្កើតការបំបែកលើខ្សែ DNA តែមួយ (Trevino និង Zhang, 2014)។ បើប្រៀបធៀបជាមួយ Cas9 Cas9n អាចកាត់បន្ថយផលប៉ះពាល់ក្រៅគោលដៅប្រកបដោយប្រសិទ្ធភាព និងធ្វើអោយប្រសើរឡើងនូវយន្តការជួសជុលកោសិកាបានយ៉ាងត្រឹមត្រូវ។ Cas9n អាចត្រូវបានប្រើដើម្បីដោះស្រាយបញ្ហាផ្សេងៗ ដូចជាការបង្កើតការបំបែកនៅទីតាំងជាក់លាក់នៅក្នុង DNA ខ្សែពីរ។ ចំពោះគោលបំណងនេះ ម៉ូលេគុល Cas9n ពីរត្រូវបានផ្សំ និងប្រើប្រាស់ជាមួយគ្នា (Yee, 2016)។ គីណាសពូជសាសន៍ចម្រុះ 3 (MLK3) គឺជាគីណាសប្រូតេអ៊ីនដែលបានធ្វើឱ្យសកម្មដោយមីតូហ្សែន ដែលបម្រើជានិយតករសំខាន់ក្នុងអំឡុងពេលនៃការរាលដាលនៃ TNBC (Cronan et al., 2012)។
MLK3 អាចធ្វើឱ្យសកម្មផ្លូវសញ្ញាច្រើនដែលនាំទៅដល់ការរីករាលដាលនៃ TNBC។ ឧទាហរណ៍ ផ្លូវ c-Jun N-terminal kinase (JNK) គ្រប់គ្រងចលនាកោសិកា និងការរិចរិលម៉ាទ្រីសក្រៅកោសិកា ហើយ MLK3 ធ្វើឱ្យផ្លូវ JNK សកម្ម ដោយហេតុនេះបង្កើនចលនាកោសិកា និងផ្តល់លក្ខណៈសម្បត្តិឈ្លានពាន (Rattanasinchai និង Gallo, 2016)។ MLK3 ក៏គ្រប់គ្រង EMT ផងដែរ។ ដើម្បីធ្វើដូចនេះ វាធ្វើឱ្យសកម្មកត្តាចម្លងខាងក្រោមដូចជា Snail, Slug និង Twist។ កត្តាទាំងនេះរារាំងការបញ្ចេញមតិនៃសញ្ញាសម្គាល់អេពីធីលីល និងលើកកម្ពស់ការបញ្ចេញមតិនៃសញ្ញាសម្គាល់មេសេនឈីម៉ាល់ ដែលនាំឱ្យមានការទទួលបាន phenotype នៃការរីករាលដាល (Casalino et al., 2023)។ MLK3 ត្រូវបានគេសង្កេតឃើញថាដើរតួនាទីក្នុងការរៀបចំឡើងវិញ ECM និងការធ្វើឱ្យសកម្មនៃប្រូតេអាសដូចជាម៉ាទ្រីស metalloproteinases (MMPs) ដែលរិចរិល ECM។ នេះជួយសម្រួលដល់ការឈ្លានពានកោសិកាដុំសាច់ និងរីករាលដាលទៅកាន់កន្លែងឆ្ងាយៗ (Katari et al., 2019)។ ដូច្នេះ ការសិក្សាពីមុនបានបង្ហាញថា MLK3 ដើរតួនាទីយ៉ាងសំខាន់នៅក្នុង TNBC។ លោក Rattanasinchai និងលោក Gallo បានប្រើប្រាស់គំរូ TNBC ដើម្បីសិក្សាពីតួនាទីរបស់ MLK3 ហើយបានរកឃើញថាវាជំរុញការវិវត្តនៃជំងឺមហារីកតាមរយៈផ្លូវសញ្ញាជាក់លាក់។ ពួកគេបានប្រើ CRISPR/Cas9n ដើម្បីកែសម្រួល MLK3 ហើយបានសង្កេតឃើញការថយចុះគួរឱ្យកត់សម្គាល់នៃការរីករាលដាលនៃ TNBC (Rattanasinchai និង Gallo, 2016)។
dCas9 ដែលជារឿយៗត្រូវបានគេហៅថា Cas9 អសកម្ម គឺជាទម្រង់ដេរីវេដែលបានកែប្រែនៃប្រូតេអ៊ីន Cas9។ មិនដូច Cas9 សកម្មទេ dCas9 ខ្វះសកម្មភាព endonuclease ដែលធ្វើឱ្យវាមិនអាចបង្កឱ្យមានការបាក់ខ្សែពីរជាន់ DNA បានទេ។ ដូច្នេះ dCas9 អាចត្រូវបានប្រើដើម្បីកំណត់គោលដៅតំបន់ជាក់លាក់នៃហ្សែនដោយមិនមានការផ្លាស់ប្តូរ ឬការកែប្រែណាមួយចំពោះលំដាប់ DNA (Wang et al., 2016)។ នៅក្នុង dCas9 ប្រូតេអ៊ីន endonuclease ពីរគឺ RuvC និង HNH ត្រូវបានធ្វើឱ្យអសកម្មដោយការទប់ស្កាត់សំណល់អាស៊ីតអាមីណូសំខាន់ៗ។ (Richter et al., 2016)។ ទោះបីជាខ្វះសកម្មភាពបំបែក DNA ក៏ដោយ dCas9 ដើរតួនាទីសំខាន់ៗមួយចំនួនក្នុងការស្រាវជ្រាវហ្សែន និងជីវបច្ចេកវិទ្យា។ ឧទាហរណ៍ វាអនុញ្ញាតឱ្យមើលឃើញតំបន់ជាក់លាក់នៃហ្សែន សម្រួលដល់បទប្បញ្ញត្តិចម្លង និងលើកកម្ពស់ការកែប្រែអេពីហ្សែន (Brocken et al., 2018)។
កត្តាចម្លង ZEB1 (ប្រអប់ស័ង្កសីភ្ជាប់ជាមួយម្រាមដៃ E-box homeobox 1) ដើរតួនាទីជាក់លាក់ និងសំខាន់ក្នុងការសម្របសម្រួលការផ្លាស់ប្តូរអេពីធីលីល-មេសេនឈីម៉ាល់ (EMT) ដែលជាដំណើរការកោសិកាដែលកើតឡើងក្នុងអំឡុងពេលនៃការវិវឌ្ឍន៍អំប្រ៊ីយ៉ុង ការជួសជុលជាលិកា និងការវិវឌ្ឍន៍នៃជំងឺមហារីក។ វាពាក់ព័ន្ធនឹងការបំលែងកោសិកាអេពីធីលីលទៅជាកោសិកាមេសេនឈីម៉ាល់ ដែលបណ្តាលឱ្យមានការផ្លាស់ប្តូររូបរាងកោសិកា ចលនា ការឈ្លានពាន។ល។ (Wu et al., 2020)។ ZEB1 រារាំងសញ្ញាសម្គាល់អេពីធីលីលច្រើន ដូចជា E-cadherin និង Occludin ដែលទទួលខុសត្រូវចំពោះការរក្សាភាពស្អិតជាប់នៃកោសិកា និងប៉ូលនៃកោសិកាអេពីធីលីលនៅក្នុង TNBC (Moreno-Bueno et al., 2008)។ លើសពីនេះ ZEB1 ធ្វើឱ្យសកម្មនូវសញ្ញាសម្គាល់មួយចំនួនដូចជា N-cadherin, vimentin និង fibronectin (Konradi et al., 2014) ហើយក៏គ្រប់គ្រងហ្សែនដែលពាក់ព័ន្ធនឹងការរៀបចំឡើងវិញនូវ cytoskeletal ដូចជា Rho GTPases និង matrix metalloproteinases (MMPs) (Huang). et al., 2014). 2022) លើសពីនេះ វាក៏ប៉ះពាល់ដល់ផ្លូវសញ្ញាផ្សេងៗដូចជា transforming growth factor-β (TGF-β) សញ្ញា Wnt ជាដើម ដោយហេតុនេះជំរុញការឈ្លានពានរបស់ដុំសាច់ និងការរីករាលដាលនៅក្នុង TNBC (Chen et al., 2016)។ ការសិក្សាជាច្រើន និងភស្តុតាងវិទ្យាសាស្ត្របង្ហាញថា ZEB1 មានសក្តានុពលដ៏អស្ចារ្យជាភ្នាក់ងារដ៏មានតម្លៃសម្រាប់ការរកឃើញ និងអន្តរាគមន៍ព្យាបាលរបស់ TNBC។ នៅក្នុងការសិក្សាថ្មីៗនេះ Waryah et al. បានប្រើគំរូ TNBC ហើយសម្រេចបានការបង្ក្រាបទាំងស្រុងនៃ ZEB1 ដោយ dCas9។ ដូច្នេះ ពួកគេបានសង្កេតឃើញភាពជាក់លាក់ខ្ពស់ និងការរារាំងស្ទើរតែទាំងស្រុងនៃ ZEB1 នៅក្នុងលក្ខខណ្ឌ in vivo (Waryah et al., 2023)។
CRISPR/Cas12 គឺជាឧបករណ៍កែសម្រួលហ្សែនមួយដែលមានឈ្មោះថា CRISPR/Cpf1។ វាត្រូវបានមកពីប្រព័ន្ធ CRISPR/Cas ដែលពាក្យ Cas12 សំដៅទៅលើប្រូតេអ៊ីនដែលជាប់ទាក់ទង CRISPR 12 (Bharathkumar et al., 2022) ដែលស្រដៀងគ្នាទាំងស្រុងទៅនឹង Cas9។ ភាពខុសគ្នាតែមួយគត់គឺថាវាមានប្រូតេអ៊ីន Cas12។ បើប្រៀបធៀបជាមួយ Cas9 Cas12 មានមុខងារពិសេសមួយចំនួនដូចជាការបង្កើតចុងស្អិតក្នុងអំឡុងពេលដំណើរការកែសម្រួលហ្សែន ខណៈពេលដែល Cas9 បង្កើតចុងមូល (Wang et al., 2021)។ លក្ខណៈសម្បត្តិរបស់ Cas12 នេះរួមចំណែកដល់បច្ចេកវិទ្យារៀបចំ DNA ជាក់លាក់របស់វា។ ក្នុងនាមជាប្រូតេអ៊ីនដែលមានសមត្ថភាពទទួលស្គាល់ និងកាត់ DNA គោលដៅបានយ៉ាងច្បាស់លាស់ វាមានភាពបត់បែនមិនធម្មតា ដែលធ្វើឱ្យវាក្លាយជាឧបករណ៍ដ៏មានប្រសិទ្ធភាពសម្រាប់កម្មវិធីជាច្រើន រួមទាំងការកែសម្រួលហ្សែន (Pickar-Oliver និង Gersbach, 2019)។
ស្រដៀងគ្នាទៅនឹងបំរែបំរួល CRISPR ផ្សេងទៀតដែរ CRISPR/Cas12 ក៏មានសមត្ថភាពបំផ្លាញ ឬធ្វើឱ្យហ្សែនសកម្មនៅក្នុង TNBC ដោយកំណត់គោលដៅហ្សែនដែលដើរតួនាទីយ៉ាងសំខាន់ក្នុងការវិវត្តន៍ ឬការឆ្លើយតបរបស់វាចំពោះការព្យាបាល (Yang និង Zhang, 2023)។ ដើម្បីសម្រេចបានដំណើរការនេះ RNA ណែនាំ (gRNA) ត្រូវបានបង្កើតឡើងដែលដឹកនាំ Cas12 ទៅកាន់ហ្សែនគោលដៅ។ នៅពេលដែល Cas12 ភ្ជាប់ទៅនឹងគោលដៅរបស់វា វាណែនាំការបំបែកខ្សែពីរនៅក្នុង DNA និងធ្វើឱ្យយន្តការជួសជុល DNA សកម្ម។ ក្នុងអំឡុងពេលដំណើរការជួសជុល នុយក្លេអូទីតមិនត្រឹមត្រូវអាចត្រូវបានបញ្ចូល ដែលនាំឱ្យមានការផ្លាស់ប្តូរហ្សែន និងបាត់បង់មុខងារ (Zhang et al., 2021a)។ លើសពីនេះ កំណែដែលប្រសើរឡើងនៃអង់ស៊ីម Cas12 (ហៅថា dCas12) ក៏ត្រូវបានប្រើដើម្បីធ្វើឱ្យហ្សែនសកម្មផងដែរ។ ដោយការផ្សំវាជាមួយនឹងសារធាតុធ្វើឱ្យសកម្មនៃការចម្លង វាអាចធ្វើទៅបានដើម្បីបង្កើតហ្សែនជាក់លាក់ ដោយហេតុនេះធ្វើឱ្យពួកវាសកម្ម។ បច្ចេកវិទ្យានេះមានសក្តានុពលដ៏អស្ចារ្យក្នុងការលើកកម្ពស់ការធ្វើឱ្យសកម្មនៃហ្សែនទប់ស្កាត់ដុំសាច់ (Sultan et al., 2022)។
ការកែសម្រួលបឋម (Prime editing) គឺជាបច្ចេកវិទ្យាកែសម្រួលហ្សែនដែលទើបនឹងអភិវឌ្ឍថ្មី និងមានកម្រិតខ្ពស់បំផុត។ វាមានសមត្ថភាពកែប្រែ DNA របស់សារពាង្គកាយមួយបានយ៉ាងច្បាស់លាស់ (Chen and Liu, 2023)។ ការកែសម្រួលបឋមត្រូវបានសម្រេចតាមរយៈការរួមបញ្ចូលសមាសធាតុសំខាន់ពីរគឺ អង់ស៊ីម CRISPR/Cas9 ដែលបានកែប្រែ និង reverse transcriptase។ តួនាទីរបស់អង់ស៊ីម CRISPR/Cas9 គឺដើម្បីកំណត់គោលដៅជាក់លាក់នៅក្នុងហ្សែន ខណៈពេលដែល reverse transcriptase ជួយកែប្រែ DNA យ៉ាងហ្មត់ចត់នៅទីតាំងគោលដៅ (Hassan et al., 2021)។ នៅក្នុងយន្តការកែសម្រួលបឋម ជំហានដំបូងពាក់ព័ន្ធនឹងការបង្កើត RNA មគ្គុទ្ទេសក៍កែសម្រួលបឋម (pegRNA) (Standage-Beier et al., 2021)។ វាមានលំដាប់គោលដៅ និងគំរូ RNA ដែលត្រូវគ្នាទៅនឹងកន្លែងកែសម្រួលដែលចង់បាននៅក្នុង DNA គោលដៅ។ បន្ទាប់មក pegRNA ត្រូវបានណែនាំទៅក្នុងកោសិកាគោលដៅ រួមជាមួយនឹង primer editing nuclease (PE2)។ PE2 គឺជាប្រូតេអ៊ីនផ្សំដែលមានអង់ស៊ីម Cas9 reverse transcriptase និង primer editing adapter (Martín-Alonso et al., 2021)។ នៅខាងក្នុងកោសិកា ស្មុគស្មាញ pegRNA និង PE2 ស្វែងរក DNA ជាក់លាក់ដែលពួកវាចង់កែប្រែ។ អង់ស៊ីម Cas9 កាត់ DNA ហើយបង្កើតគំរូមួយដែលមានខ្សែតែមួយ (Choi et al., 2022)។ អង់ស៊ីម Reverse transcriptase ប្រើគំរូនេះដើម្បីរៀបចំ DNA សម្រាប់ការកែសម្រួល។ រួមជាមួយនឹងការចម្លង DNA ការណែនាំសម្រាប់ការកែសម្រួលគំរូ RNA ក៏ត្រូវបានរួមបញ្ចូលផងដែរ។ ជាចុងក្រោយ ខ្សែ DNA ដែលទើបបង្កើតថ្មីត្រូវបានប្រើជាគំរូដើម្បីជួសជុលការបំបែកនៅក្នុង DNA ដែលបណ្តាលឱ្យមានលំដាប់ DNA ដែលបានផ្លាស់ប្តូរដែលមានការកែប្រែដែលចង់បាន (Ochoa-Sanchez et al., 2021)។ យន្តការកែសម្រួលបឋមអាចនាំឱ្យមានការផ្លាស់ប្តូរយ៉ាងទូលំទូលាយនៅក្នុងហ្សែន។ វាអាចកំណត់គោលដៅការផ្លាស់ប្តូរចំណុច ការបញ្ចូល ការលុប និងសូម្បីតែការជំនួសហ្សែន (Anzalone et al., 2019; Chen និង Liu, 2023)។ ការកែសម្រួលបឋមផ្តល់នូវគុណសម្បត្តិជាច្រើនលើបច្ចេកវិទ្យាកែសម្រួលហ្សែនមុនៗ។ ទាំងនេះរួមមានភាពត្រឹមត្រូវកើនឡើង ផលប៉ះពាល់ក្រៅគោលដៅថយចុះ និងសមត្ថភាពក្នុងការកែសម្រួល DNA ដោយមិនពឹងផ្អែកលើការបំបែកខ្សែពីររបស់ DNA (Anzalone et al., 2020)។
បច្ចេកវិទ្យា CRISPR/Cas9 ត្រូវបានបង្កើតឡើងដំបូងដើម្បីការពារបាក់តេរីពីការផ្ទេរប្លាស្មីត និងការឆ្លងមេរោគហ្វាស ហើយក្រោយមកត្រូវបានប្រើប្រាស់ឡើងវិញជាឧបករណ៍កំណត់គោលដៅ DNA ដែលមានមូលដ្ឋានលើ RNA ដ៏មានប្រសិទ្ធភាពសម្រាប់ការកែសម្រួលហ្សែន (Jiang និង Doudna, 2017)។ លើសពីនេះ ប្រព័ន្ធ CRISPR/Cas9 ត្រូវបានរាយការណ៍ថាមានវត្តមាននៅក្នុងហ្សែនបាក់តេរី និងហ្សែនបុរាណចំនួន 50% និង 87% រៀងៗខ្លួន (Ishino et al., 2018)។ CRISPR/Cas9 គឺជាឧបករណ៍ដ៏មានសក្តានុពលសម្រាប់ការលុប ការបញ្ចូល និងការកែតម្រូវលំដាប់ហ្សែនមិនប្រក្រតីណាមួយដោយប្រើរបៀបនៅក្នុងវីវ៉ូ និងក្នុងវីត្រូ (Sabit et al., 2021)។ លើសពីនេះ CRISPR/Cas9 ត្រូវបានបង្ហាញថាជាផ្នែកមួយនៃប្រព័ន្ធភាពស៊ាំសម្របខ្លួនដោយសារតែភាពជាក់លាក់របស់វាសម្រាប់ហ្សែនគោលដៅដែលចាប់អារម្មណ៍ (Chen និង Zhang, 2018)។
CRISPR/Cas9 មាន Cas9 និង RNA ណែនាំតែមួយ (sgRNA)។ Cas9 គឺជាអង់ដូនុយក្លេអាសដែលផ្សំឡើងពីសមាសធាតុប្រូតេអ៊ីនច្រើន។ លើសពីនេះ Cas9 មានលក្ខណៈសម្បត្តិរចនាសម្ព័ន្ធ និងរូបរាងតែមួយគត់ (Pacesa et al., 2022) ព្រោះវាមានពីរផ្នែក៖ ការទទួលស្គាល់ (REC) និងនុយក្លេអាស (NUC)។ ផ្នែក REC ត្រូវបានបែងចែកជាបីតំបន់ទៀត៖ REC1, REC2 និងស្ពានអេលីស (Cromwell et al., 2018)។ NUC មានបីផ្នែក គឺ RuvC (RuvC I, RuvC II, RuvC III), HNH និងដែនអន្តរកម្ម protospacer adjacent motif (PAM) (រូបភាពទី 1) (Song et al., 2016)។ sgRNA មានសមាសធាតុពីរ រួមមាន CRISPR RNA (crRNA) និង transcoding small RNA (tracer RNA) (រូបភាពទី 1)។ sgRNA ភ្ជាប់ប្រូតេអ៊ីន Cas9 ទៅនឹង connexins ដើម្បីបង្កើតជាស្មុគស្មាញសកម្ម ដែលត្រូវបានគេស្គាល់ផងដែរថាជាស្មុគស្មាញ effector (Richter et al., 2012)។ crRNA គឺជាគូមូលដ្ឋាននុយក្លេអូទីតចំនួន 18–20 ដែលដើរតួនាទីយ៉ាងសំខាន់ក្នុងការទទួលស្គាល់លំដាប់ DNA គោលដៅ។ លើសពីនេះ crRNA ផ្គូផ្គងជាមួយ DNA គោលដៅ ហើយ tracrRNA ដើរតួជារនាំងសម្រាប់ nuclease Cas9 ដើម្បីភ្ជាប់ DNA គោលដៅ (Manghwar et al., 2019)។ ម្យ៉ាងវិញទៀត លំដាប់ PAM មាននុយក្លេអូទីតចំនួន 3 ដែលបញ្ជាក់ បញ្ជាក់ និងសម្របសម្រួលការភ្ជាប់នៃស្មុគស្មាញ effector ទៅនឹង DNA។ អនុឯកតានៃស្មុគស្មាញប្រូតេអ៊ីន Cas9 គឺ RuvC និង HNH មានសកម្មភាពកាតាលីករ (Richter et al., 2012; Asmamaw និង Zawdie, 2021)។ ដែននុយក្លេអូទីត HNH នៃអនុឯកតា Cas9 កាត់ខ្សែ DNA ដែលភ្ជាប់ជាមួយ crRNA។ ដូមេននុយក្លេអាស RuvC កាត់ខ្សែ DNA ផ្សេងទៀត ហើយបង្កើតការបាក់ខ្សែពីរ (DSBs) បន្ទាប់ពីនោះយន្តការជួសជុលការបាក់ DNA ពីរផ្សេងគ្នាត្រូវបានធ្វើឱ្យសកម្ម (Jiang និង Doudna, 2017) (រូបភាពទី 1)។
រូបភាពទី 1. ទិដ្ឋភាពទូទៅនៃ CRISPR/Cas9 (ក)។ សមាសធាតុនៃប្រព័ន្ធ CRISPR/Cas9៖ (i)។ អង់ស៊ីម Cas9 endonuclease ទទួលខុសត្រូវចំពោះការកាត់លំដាប់ DNA គោលដៅ (ii) RNA ណែនាំតែមួយ (sg) ដែលជាលទ្ធផលនៃការបញ្ចូលគ្នានៃ crRNA និង tra-crRNA chimeras។ (ពីរ)។ Cas9 រួមបញ្ចូលសមាសធាតុជាច្រើនដូចជា Rec I, Rec II, NUC lobe (HNH និង Ruv C គឺជាសមាសធាតុរង) និងដែនអន្តរកម្ម PAM (C) ដែលមានមុខងារដែលត្រូវគ្នា។ ស្មុគស្មាញប្រូតេអ៊ីន CRISPR/Cas9 កាត់លំដាប់ DNA ទៅជាទម្រង់មិនបំពេញបន្ថែម និងទម្រង់បំពេញបន្ថែម (D)។ CRISPR/Cas9 កែសម្រួលហ្សែនជាបីដំណាក់កាល៖ ការទទួលស្គាល់ ការកាត់ និងការជួសជុល។ sg-RNA ដែលបានរចនាឡើងណែនាំ Cas9 និងទទួលស្គាល់លំដាប់ដែលចង់បានតាមរយៈសមាសធាតុបំពេញបន្ថែម crRNA។ Cas9 ទទួលស្គាល់លំដាប់ PAM នៅ 5′-NGG-3′ ហើយរលាយ DNA បង្កើតជា DNA-RNA ចម្រុះ និងធ្វើឱ្យការកាត់សកម្ម។ ដែន HNH នៃ Cas9 កាត់ខ្សែសង្វាក់បំពេញបន្ថែម ហើយដែន RuvC កាត់ខ្សែសង្វាក់មិនបំពេញបន្ថែម។ CRISPR/Cas9 ជួសជុល dsDNA ដោយបំបែកវាតាមវិធីពីរយ៉ាង៖ ការតភ្ជាប់ចុងមិនដូចគ្នា (NHEJ) និងការជួសជុលដឹកនាំដោយដូចគ្នា (HDR)។ NHEJ ជួសជុល DNA ខ្សែពីរជាន់ក្នុងករណីដែលគ្មាន DNA ដូចគ្នាបរទេសតាមរយៈដំណើរការអង់ស៊ីម ដែលជាយន្តការងាយនឹងកំហុសដែលអាចបញ្ចូល ឬដកចេញលំដាប់ DNA ចៃដន្យ។ HDR គឺជាក់លាក់ណាស់ ហើយតម្រូវឱ្យមានគំរូ DNA ដូចគ្នា។
ផ្លូវជួសជុលដែលសម្របសម្រួលដោយ CRISPR/Cas9 រួមមានយន្តការភ្ជាប់ចុងមិនដូចគ្នា (NHEJ) និងយន្តការជួសជុលដែលដឹកនាំដោយដូចគ្នា (HDR)។ NHEJ គឺជាផ្លូវងាយនឹងកំហុស ពីព្រោះវាពាក់ព័ន្ធនឹងការបញ្ចូល ឬការលុប ហើយមិនតម្រូវឱ្យមានលំនាំណាមួយក្នុងអំឡុងពេលយន្តការជួសជុលនោះទេ។ វាប្រើនុយក្លេអូទីតចៃដន្យដើម្បីបង្កើតប្រូតេអ៊ីនស្តង់ដារ (Abbasi et al., 2021)។ ប្រព័ន្ធជួសជុលនេះមានស្មុគស្មាញចំនួនបួន ដូចជាស្មុគស្មាញ KU ស្មុគស្មាញប្រូតេអ៊ីនបំពេញបន្ថែមប្រភេទទី 4 (XRCC-4) អង់ស៊ីមដំណើរការចុង DNA និងប្រូតេអ៊ីនគីណាស DNA-PKcs (Abbasi et al., 2021)។ ប្រូតេអ៊ីនស្មុគស្មាញ KU មានអនុឯកតាពីរគឺ Ku 70 និង Ku 80 ហើយដើរតួនាទីយ៉ាងសំខាន់នៅក្នុងយន្តការ NHEJ ដោយសារយន្តការជួសជុលត្រូវបានផ្តួចផ្តើមដោយការភ្ជាប់នៃអនុឯកតាពីរ (Ku 70 និង Ku 80) ទៅនឹងចុងមូល ឬចុងមូលស្ទើរតែមូលនៃ DNA គោលដៅ (Abbasi et al., 2021) ដែលបម្រើជារនាំងដើម្បីជ្រើសរើសកត្តាផ្សេងទៀតដែលទាក់ទងនឹង NHEJ ទៅកាន់កន្លែងរងរបួស (Yang et al., 2020)។ XRCC-4 និង DNA ligase ត្រូវបានផ្សំឡើងពីអាស៊ីតអាមីណូចំនួន 334 និង 911 រៀងៗខ្លួន ហើយស្មុគស្មាញ XRCC4-DNA ligase IV ជំរុញការចងនៃចុង DNA (Chatterjee et al., 2015)។ អង់ស៊ីមដំណើរការចុង DNA ដែលត្រូវបានគេស្គាល់ផងដែរថាជា polynucleotide kinase 3′-phosphate គឺជាអង់ស៊ីមដំណើរការចុង DNA។ វាអាចយកក្រុម 3′P នៅក្នុង DNA និង phosphorylate ក្រុម 5′OH ចេញក្នុងអំឡុងពេលជួសជុល DSB។ វាក៏ពាក់ព័ន្ធនឹងការជួសជុលការបាក់ខ្សែតែមួយ (SSBs) ដោយប្រើផ្លូវជួសជុល SSB (Chatterjee et al., 2015)។ ប្រូតេអ៊ីនគីណាស DNA-PKcs គឺជាប្រូតេអ៊ីនគីណាសដែលពឹងផ្អែកលើ DNA ដែលមានអនុឯកតាកាតាលីករនៃ PIKKs (phosphatidylinositol 3-kinase-related kinases) និងក្រុមគ្រួសារ ataxia telangiectasia mutated (ATM) ក៏ដូចជា ATM និង Rad3-related ATRs។ ការបាក់ខ្សែ (DSBs) និងការបាក់ខ្សែតែមួយ (Yue et al., 2020; Peng et al., 2016)។
HDR គឺជាយន្តការជួសជុលដែលមានភាពត្រឹមត្រូវ និងសមស្របជាង ពីព្រោះព័ត៌មានត្រូវបានចម្លងដោយប្រើទម្រង់ដដែលនៃ DNA duplex ដូចគ្នា ទោះបីជាវាតម្រូវឱ្យមានវត្តមាននៃក្រូម៉ាទីតបងប្អូនក៏ដោយ។ នេះកើតឡើងក្នុងដំណាក់កាល S/G2 នៃវដ្តកោសិកាថនិកសត្វ។ HDR កើតឡើងជាចម្បងនៅក្នុងប្រភេទផ្សិត ប៉ុន្តែ NHEJ គឺមានសារៈសំខាន់ចំពោះថនិកសត្វ (Burma et al., 2006; Abbasi et al., 2021)។ យន្តការជួសជុលពេញលេញត្រូវបានបង្ហាញក្នុងរូបភាពទី 1។
ដោយសារ TNBC បណ្តាលមកពីភាពមិនប្រក្រតីនៃហ្សែន និងអេពីហ្សែន ការកែតម្រូវភាពមិនប្រក្រតីនៃហ្សែន/អេពីហ្សែនសាហាវដោយប្រើ CRISPR/Cas9 អាចជាវិធីសាស្រ្តព្យាបាលសមហេតុផល (Chen et al., 2019)។ លើសពីនេះ កត្តាចម្លងមួយចំនួនដែលពាក់ព័ន្ធនឹងបទប្បញ្ញត្តិចម្លងជាក់លាក់កោសិកាអាចបង្ហាញពីលក្ខណៈតែមួយគត់នៃកោសិកាមហារីក ដែលបង្ហាញថាបទប្បញ្ញត្តិចម្លងអាចជាវិធីសាស្រ្តដ៏ល្អសម្រាប់ការព្យាបាលជំងឺមហារីក (Drost et al., 2017)។ ការកេងប្រវ័ញ្ចលក្ខណៈពិសេសម៉ូលេគុលទាំងនេះនៃដុំសាច់ ដូចជាពិការភាពហ្សែន អេពីហ្សែន និងប្រតិចារិក សម្រាប់ការអភិវឌ្ឍថ្នាំអាចធ្វើអោយប្រសើរឡើងនូវលទ្ធផលគ្លីនិក និងកាត់បន្ថយថ្លៃដើមនៃការពិនិត្យ។ CRISPR គឺជាឧបករណ៍កែសម្រួលហ្សែនដ៏មានសក្តានុពលមួយដែលមិនត្រឹមតែអាចរកឃើញ និងកំណត់អត្តសញ្ញាណគោលដៅហ្សែនបង្កជំងឺមហារីកប៉ុណ្ណោះទេ ប៉ុន្តែថែមទាំងអាចត្រូវបានប្រើដើម្បីកែសម្រួល ទប់ស្កាត់ និងកែប្រែអុនកូហ្សែនតាមអេពីហ្សែននៅក្នុងកោសិកាមនុស្ស (តារាងទី 1) (Ahmed et al., 2021)។ ការត្រួតពិនិត្យ CRISPR ជាច្រើនត្រូវបានធ្វើឡើងដើម្បីរកមើលហ្សែនដែលទាក់ទងនឹងសារធាតុទប់ស្កាត់ដុំសាច់ អុនកូហ្សែន និងភាពធន់នឹងថ្នាំ។ ការប្រើប្រាស់ CRISPR/Cas9 ដើម្បីកែសម្រួលហ្សែន TNBC ផ្សេងៗត្រូវបានបង្ហាញក្នុងរូបភាពទី 2។
រូបភាពទី 2. ការកែសម្រួលហ្សែននៃអ oncogenes TNBC ជាច្រើនប្រភេទដោយប្រើ CRISPR/Cas9 ដែលបណ្តាលឱ្យមានការថយចុះនៃការលូតលាស់ដុំសាច់ និងការរីករាលដាល។ អ oncogenes ទាំងនេះរួមមាន CDK7, NAT1, UBR5, YTHDF2, ITGA9, CXCR4 និង CXCR7, Crypto1, ROR1 និង ST8SIA ដែលពាក់ព័ន្ធនឹងការកើតឡើង និងការរីករាលដាលនៃ TNBC។
ការធ្វើចំណាកស្រុកកោសិកាមហារីក ការឈ្លានពាន និងការផ្លាស់ប្តូរអេពីធីលីល-មេសេនឈីម៉ាល់ (EMT) ត្រូវបានផ្សារភ្ជាប់ជាមួយ ITGA9។ ការសិក្សាពីមុនបានបង្ហាញថា ITGA9 គឺជាតួអង្គសំខាន់នៅក្នុងផ្លូវ Notch និងដើរតួនាទីគួរឱ្យចាប់អារម្មណ៍ក្នុងការរីករាលដាលនៃជំងឺមហារីក rhabdomyosarcoma (Molist et al., 2020)។ លើសពីនេះ ITGA9 ត្រូវបានគេរកឃើញថាមានទំនាក់ទំនងយ៉ាងជិតស្និទ្ធជាមួយនឹងការព្យាករណ៍របស់អ្នកជំងឺនៅក្នុងប្រភេទដុំសាច់ជាច្រើន រួមទាំងជំងឺមហារីកសុដន់ (Wang Z. et al., 2019)។ លើសពីនេះ ការវិភាគជីវព័ត៌មានវិទ្យានៃ ITGA9 បានបង្ហាញថា ការបញ្ចេញមតិរបស់វានៅក្នុង TNBC គឺខ្ពស់ជាងប្រភេទរងនៃជំងឺមហារីកសុដន់ដទៃទៀត។ កម្រិត ITGA9 កើនឡើងត្រូវបានផ្សារភ្ជាប់ជាមួយនឹងការរីករាលដាលនៃដុំសាច់ និងការកើតឡើងវិញចំពោះអ្នកជំងឺ TNBC។ ការដកចេញនូវ ITGA9 ដោយ CRISPR/Cas9 បណ្តាលឱ្យមានលក្ខណៈសម្បត្តិដូចកោសិកាដើមមហារីក (CSC) ការបង្កើតសរសៃឈាមថ្មី ការលូតលាស់ដុំសាច់ និងការថយចុះនៃការរីករាលដាលដោយការជំរុញការរិចរិល β-catenin នៅក្នុង TNBC (Wang Z. et al., 2019)។
Crypto-1 គឺជាសមាជិកនៃគ្រួសារ TGF-β ហើយវាមានសារៈសំខាន់ខ្លាំងណាស់សម្រាប់ការបង្កើតអំប្រ៊ីយ៉ុងដំបូង ការថែរក្សាកោសិកាដើម និងការរីករាលដាលនៃជំងឺមហារីក (Ishii et al., 2021)។ ត្រូវបានគេស្គាល់ផងដែរថាជា Tdgf-1 វាគឺជាប្រូតេអ៊ីនសញ្ញា GPI ដែលបង្កើតឡើងដោយផ្អែកលើ oncogenic ដែលពាក់ព័ន្ធនឹងការគ្រប់គ្រងការបង្កើតនៃស្នាមបឋម mesoderm និង endoderm ក៏ដូចជាការបង្កើតភាពមិនស៊ីមេទ្រីឆ្វេង/ស្តាំក្នុងការវិវត្តនៃសរីរាង្គរាងកាយក្នុងអំឡុងពេល embryogenesis (Zhang et al., 2021b)។ លើសពីនេះ Cripto-1 ត្រូវបានបង្ហាញថាពាក់ព័ន្ធនឹងការផ្លាស់ប្តូរ epithelial-mesenchymal (EMT) ជាសញ្ញាសម្គាល់កោសិកាដើម (Zhang et al., 2021b)។ EMT គឺមានសារៈសំខាន់មិនត្រឹមតែសម្រាប់ដំណើរការផ្សេងៗដូចជាការវិវត្តនៃអំប្រ៊ីយ៉ុង ជាលិកាភ្ជាប់ និងការព្យាបាលរបួសប៉ុណ្ណោះទេ ប៉ុន្តែក៏សម្រាប់ការឈ្លានពានមហារីក និងការរីករាលដាលនៃជំងឺមហារីកផងដែរ។ លើសពីនេះ Cripto-1 ត្រូវបានបង្ហាញថាមានអន្តរកម្មជាមួយអ្នកទទួល Notch ចំនួនបួន និងបង្កើនភាពចាស់ទុំក្រោយការបកប្រែរបស់ពួកគេ (Brandstadter and Maillard, 2019)។ ផ្លូវសញ្ញា Notch ត្រូវបានគេដឹងថាពាក់ព័ន្ធនឹងការថែរក្សាកោសិកាមហារីកសុដន់របស់មនុស្ស។ ការសិក្សាបានបង្ហាញថា ការកម្ចាត់ចោល Crypto-1 ដែលសម្របសម្រួលដោយ CRISPR/Cas9 ទប់ស្កាត់ការលូតលាស់ និងការរីករាលដាលនៃជំងឺមហារីក។ ដូច្នេះ Crypto-1 អាចក្លាយជាគោលដៅព្យាបាលដ៏សំខាន់សម្រាប់ TNBC (Castro et al., 2015)។
ប្រូតេអ៊ីន XCL12 និងឧបករណ៍ទទួលគីមីគីន CXC (CXCR4 និង CXCR7) របស់វាដើរតួនាទីផ្សេងៗគ្នាក្នុងការរីកសាយភាយ ការលូតលាស់ ការធ្វើចំណាកស្រុក និងការឈ្លានពានរបស់កោសិកាមហារីក (Wu et al., 2015)។ ឧបករណ៍ទទួលគីមីទាំងនេះត្រូវបានផ្សារភ្ជាប់ជាមួយនឹងការវិវត្តរបស់ TNBC តាមរយៈផ្លូវសញ្ញាច្រើនទាំងនៅក្នុងគំរូក្នុង vivo និងក្នុង vitro (Wu et al., 2015)។ លើសពីនេះ ការធ្វើឱ្យសកម្មនៃ CXCR4 និង CXCR7 ត្រូវបានផ្សារភ្ជាប់ជាមួយនឹងភាពងាយរងគ្រោះកាន់តែខ្លាំងចំពោះការរីករាលដាល និងការព្យាករណ៍មិនល្អនៅក្នុង TNBC (Karn et al., 2022)។ ដូច្នេះ ការកម្ចាត់ CXCR4 និង CXCR7 អាចក្លាយជាហ្សែនគោលដៅថ្នាំដែលមានប្រសិទ្ធភាពសម្រាប់ការព្យាបាលជំងឺមហារីកសុដន់ រួមទាំង TNBC។ ការសិក្សាដោយ Yang et al. Yang et al (2019) បានប្រើ CRISPR/Cas9 ដើម្បីកម្ចាត់ហ្សែន CXCR4 និង CXCR7 រួមគ្នា ហើយបានរកឃើញថា ការរីកសាយភាយ ការលូតលាស់ ការធ្វើចំណាកស្រុក និងការឈ្លានពានរបស់ TNBC ត្រូវបានរារាំងយ៉ាងខ្លាំង (Yang et al., 2019)។
កម្រិតកើនឡើងនៃ miR-3662 ដែលជា oncogene TNBC ត្រូវបានគេសង្កេតឃើញនៅក្នុងជាលិកាមហារីកសុដន់ (Yi et al., 2022)។ ការបំផ្លាញ miR-3662 ត្រូវបានបង្ហាញថារារាំងការលូតលាស់ដុំសាច់មហារីកសុដន់ និងការរីករាលដាលទាំងនៅក្នុង vivo និងនៅក្នុង vitro (Agarwal និង Gupta, 2021)។ HBP-1 គឺជាសារធាតុទប់ស្កាត់ដ៏មានឥទ្ធិពលនៃការបញ្ជូនសញ្ញា Wnt/-catenin ហើយទំនងជាទទួលខុសត្រូវចំពោះការលូតលាស់ដែលសម្របសម្រួលដោយ miR-3662 នៃកោសិកា TNBC។ ថ្មីៗនេះ Yi et al. បានរកឃើញថាអ័ក្ស miR-3662-HBP1 គ្រប់គ្រងផ្លូវបញ្ជូនសញ្ញា Wnt/-catenin នៅក្នុងកោសិកា TNBC (Yi et al., 2022)។ ដោយសារតែការបញ្ចេញមតិជាក់លាក់នៃដុំសាច់របស់វា miR-3662 អាចជាគោលដៅព្យាបាលដ៏មានសក្តានុពលសម្រាប់ TNBC។ ដូច្នេះ ការបំផ្លាញ miR-3662 ដែលសម្របសម្រួលដោយ CRISPR/Cas9 អាចជាវិធីសាស្រ្តដ៏ល្អសម្រាប់ការអភិវឌ្ឍថ្នាំថ្មីសម្រាប់ការព្យាបាល TNBC។
UBR5 គឺជាប្រូតេអ៊ីននុយក្លេអូផូស្វ័រ 300 kDa ដែលត្រូវបានកំណត់ថាជានិយតករសំខាន់នៃការកើតដុំសាច់ ការរាលដាល និងការឆ្លើយតបនៃប្រព័ន្ធភាពស៊ាំនៅក្នុងជំងឺមហារីកផ្សេងៗ (Shearer et al., 2015; Fu et al., 2023)។ UBR5 ត្រូវបានគេរាយការណ៍ថាមានការកើនឡើងខ្ពស់នៅក្នុងគំរូ TNBC និងជំរុញមុខងារ ERα ដោយជំរុញការរីកសាយតាមរយៈសកម្មភាព ubiquitin ligase របស់វា (Bolt et al., 2015)។ ការសិក្សាស៊ីក្វេនអ៊ិចសូមទាំងមូលនៃគំរូ TNBC បឋមក៏បានបង្ហាញពីការកើនឡើងនៃការបញ្ចេញមតិនៃ UBR5 ដែលបង្ហាញពីតួនាទីរបស់វាក្នុងការអភិវឌ្ឍ TNBC។ លើសពីនេះ ការលុប UBR5 ដែលជំរុញដោយ CRISPR/Cas9 បានបង្ហាញពីការរារាំងយ៉ាងសំខាន់នៃការរាលដាល និងការលូតលាស់របស់ TNBC នៅក្នុងគំរូកណ្ដុរពិសោធន៍។ លើសពីនេះ ការដាក់បញ្ចូល UBR5 នៅក្នុងគំរូកណ្ដុរប្រភេទព្រៃបានស្តារមុខងារពេញលេញរបស់វាឡើងវិញ ខណៈដែលឥទ្ធិពលនេះមិនត្រូវបានគេសង្កេតឃើញនៅក្នុងពូជដែលមានការផ្លាស់ប្តូរហ្សែនអសកម្ម (Liao et al., 2017)។ កង្វះ UBR5 ត្រូវបានផ្សារភ្ជាប់ជាមួយនឹងការកើនឡើងនៃ apoptosis, necrosis និងការរារាំងការលូតលាស់ដុំសាច់នៅក្នុង TNBC ដោយសារតែ angiogenesis មិនល្អ។ ដោយសារតែការបាត់បង់ UBR5 ការរីករាលដាលនៃដុំសាច់ទៅកាន់សរីរាង្គឆ្ងាយត្រូវបានកាត់បន្ថយ ហើយ UBR5 បង្កឱ្យមាន EMT មិនប្រក្រតីជាចម្បងដោយការកាត់បន្ថយការបញ្ចេញមតិ E-cadherin (Zhang និង Weinberg, 2018)។ ថ្មីៗនេះ UBR5 ត្រូវបានបង្ហាញថាជាកត្តាសំខាន់មួយនៅក្នុងការចម្លង PDL1 ដែលបង្កឡើងដោយ IFN-γ នៅក្នុង TNBC ដោយសារតែកង្វះសកម្មភាព ubiquitination E3 ។ ការវិភាគ transcriptome RNA បានបង្ហាញថា UBR5 អាចមានឥទ្ធិពលជាប្រព័ន្ធលើហ្សែនដែលទាក់ទងនឹងផ្លូវ IFN-γ និងជំរុញការធ្វើឱ្យសកម្ម PDL1 ដោយបង្កើនកម្រិតធ្វើឱ្យសកម្មនៃប្រូតេអ៊ីន kinase RNA (PKR) និងឧបករណ៍បញ្ជូនសញ្ញា និងសារធាតុធ្វើឱ្យសកម្មរបស់វា។ transcription 1 (STAT1) និង interferon regulatory factor 1 (IRF1)។ ទោះជាយ៉ាងណាក៏ដោយ ការលុបបំបាត់ការបញ្ចេញមតិ UBR5 និង PD-L1 រួមគ្នាដែលសម្របសម្រួលដោយ CRISPR/Cas9 មានប្រសិទ្ធភាពព្យាបាលសហការជាងការបិទផ្លូវតែមួយមុខ ជាមួយនឹងផលប៉ះពាល់យ៉ាងជ្រាលជ្រៅទៅលើមីក្រូបរិស្ថានដុំសាច់ (Wu et al., 2022)។ ដូច្នេះ CRISPR/Cas9 អាចជាឧបករណ៍សំខាន់មួយដើម្បីរារាំងមុខងារ UBR5 ដោយហេតុនេះទប់ស្កាត់ការរីករាលដាលនៃ TNBC និងការលូតលាស់ដុំសាច់។
ROR1 គឺជាប្រូតេអ៊ីនឆ្លងភ្នាសប្រភេទទី 1 ដែលត្រូវបានបញ្ចេញចេញក្នុងអំឡុងពេលមហារីក និងការវិវឌ្ឍន៍អំប្រ៊ីយ៉ុង ហើយត្រូវបានកំណត់ថាជាប្រូតេអ៊ីន oncofetal (Nicholas Borcherding, 2014)។ ឥរិយាបថឈ្លានពាននៃជំងឺមហារីកមនុស្សជាច្រើនត្រូវបានផ្សារភ្ជាប់ជាមួយនឹងការកើនឡើងនៃ ROR1។ លទ្ធផលដ៏គួរឱ្យសង្ឃឹមត្រូវបានទទួលពីការសិក្សានៅក្នុង vivo និងនៅក្នុង vitro ដែលពាក់ព័ន្ធនឹងសមាសធាតុព្យាបាលដែលកំណត់គោលដៅ ROR1 (Chien et al., 2016)។ កម្រិតកើនឡើងនៃ mRNA ROR1 នៅក្នុងការធ្វើកោសល្យវិច័យជាលិកាសុដន់ក៏ត្រូវបានផ្សារភ្ជាប់ជាមួយនឹងដុំសាច់ basal-like breast (BL) ដែលឈ្លានពាន និងការធ្វើចំណាកស្រុករបស់វាទៅកាន់ផ្នែកផ្សេងទៀតនៃរាងកាយ។ លើសពីនេះ ការបញ្ចេញមតិលើសកម្រិតនៃ ROR1 ត្រូវបានកំណត់ថាជាសញ្ញាសម្គាល់ព្យាករណ៍សម្រាប់ការវិវត្តនៃ TNBC (Chien et al., 2016)។ ទោះជាយ៉ាងណាក៏ដោយ ការបិទសំឡេង ROR1 ដោយប្រើ CRISPR/Cas9 ដើម្បីទប់ស្កាត់ការលូតលាស់ និងការរីករាលដាលនៃ TNBC នឹងជាយុទ្ធសាស្ត្រដ៏មានប្រសិទ្ធភាព។
ដំណើរការស៊ីយ៉ាលីឡាស្យុងពាក់ព័ន្ធនឹងការបន្ថែមអាស៊ីតស៊ីយ៉ាលីកទៅក្នុងគ្លីកូកុងជូហ្គេត ដែលត្រូវបានជំរុញដោយស៊ីយ៉ាលីលត្រានហ្វែរសាស (STs)។ ST8SIA1 ជាកម្មសិទ្ធិរបស់គ្រួសារ ST ហើយដើរតួនាទីយ៉ាងសំខាន់ក្នុងការវិវត្តនៃជំងឺផ្សេងៗដូចជា ជំងឺមហារីកឈាមឡាំហ្វូស៊ីទិក និងជំងឺមហារីកពោះវៀនធំ (Chang et al., 2018)។ ការវិភាគលំដាប់ RNA បង្ហាញថា ST8SIA1 ត្រូវបានបង្ហាញយ៉ាងខ្លាំងនៅក្នុងជាលិកាសុដន់របស់អ្នកជំងឺ TNBC ហើយមានទំនាក់ទំនងវិជ្ជមានជាមួយនឹងការផ្លាស់ប្តូរនៅក្នុងហ្សែនទប់ស្កាត់ដុំសាច់ p53 ដែលអាចរួមចំណែកដល់ការវិវត្តនៃ TNBC (Battula et al., 2017)។ លើសពីនេះ ST8SIA1 មានជាប់ពាក់ព័ន្ធនឹងការរីករាលដាល និងការកើតឡើងវិញនៃ TNBC ដែលបង្ហាញថាវាដើរតួនាទីយ៉ាងសំខាន់ក្នុងការកើតឡើង និងការវិវត្តនៃ TNBC។ នៅក្នុងគំរូក្នុងវីត្រូនៃ TNBC ការបំផ្លាញ ST8SIA1 ដោយ CRIPSR/Cas9 ត្រូវបានបង្ហាញថារារាំងការលូតលាស់ និងការរីករាលដាល (Battula et al., 2017)។ នេះបង្ហាញថា CRISPR/Cas9 អាចជាឧបករណ៍សំខាន់មួយសម្រាប់រារាំងមុខងាររបស់អុនកូហ្សែន ST8SIA1 ក្នុងការព្យាបាល TNBC។
NAT1 គឺជាអង់ស៊ីមមេតាបូលីសដែលជំរុញការបង្កើតសមាសធាតុ xenobiotic ដំណាក់កាលទី II ហើយត្រូវបានបង្ហាញនៅក្នុងជាលិកាមនុស្សស្ទើរតែទាំងអស់។ NAT1 អាចប្រើ cofactor folate ដើម្បីកំណត់គោលដៅ acetyl-CoA (acetyl-CoA) សូម្បីតែក្នុងករណីដែលគ្មានស្រទាប់ខាងក្រោមអាមីនអារ៉ូម៉ាទិចក៏ដោយ (Stepp et al., 2015; Laurieri et al., 2014)។ ការសិក្សាបានបង្ហាញថា NAT1 គ្រប់គ្រងមុខងារ matrix metalloproteinase 9 (MMP9) នៅក្នុងគំរូកោសិកាមហារីកសុដន់ និងការពារប្រឆាំងនឹងប្រភេទអុកស៊ីសែនដែលមានប្រតិកម្ម (ROS) អំឡុងពេលអត់ឃ្លានជាតិស្ករ (Wang et al., 2018)។ ការលុប NAT1 ត្រូវបានបង្ហាញថារារាំងស្មុគស្មាញ pyruvate dehydrogenase ដែលនាំឱ្យមានមុខងារមិនប្រក្រតីរបស់មីតូខនឌ្រី (Wang L. et al., 2019)។ លើសពីនេះ របាយការណ៍ផ្សេងៗបានបង្ហាញថាការរារាំង NAT1 ដោយប្រើម៉ូលេគុលតូចៗ និងការបិទ siRNA អាចកាត់បន្ថយការឈ្លានពាន និងការរីកសាយនៃកោសិកាមហារីកសុដន់ (Stepp et al., 2018)។ ថ្មីៗនេះ CRISPR/Cas9 ត្រូវបានប្រើដើម្បីទប់ស្កាត់ NAT1 នៅក្នុងខ្សែកោសិកាមហារីកសុដន់ MDA-MB-231 ដែលប៉ះពាល់ដល់ការរំលាយអាហារកោសិកាអាស្រ័យលើកម្រិតនៃការបញ្ចេញមតិរបស់វា។ ការសិក្សានេះក៏បានបង្ហាញផងដែរថា NAT-1 គឺមានសារៈសំខាន់សម្រាប់ការវិវត្ត និងការរីករាលដាលនៃ TNBC (Carlisle et al., 2020)។
ការចម្លងដែលសម្របសម្រួលនៃអុងកូហ្សែនត្រូវបានគ្រប់គ្រងដោយសារធាតុជំរុញខ្លាំង កត្តាចម្លង និងសហកត្តា (Hnisz et al., 2015)។ លើសពីនេះ ក្រុមនៃគីណាសដែលពឹងផ្អែកលើស៊ីគ្លីន (CDKs) ដូចជា CDK7, CDK8, CDK9, CDK12 និង CDK13 គឺត្រូវបានទាមទារសម្រាប់ការគ្រប់គ្រងការចម្លង។ ក្នុងចំណោមនោះ CDK7 ពាក់ព័ន្ធនឹងការផូស្វ័រនៃ RNA polymerase II ដែលមានសារៈសំខាន់ខ្លាំងណាស់សម្រាប់ការចាប់ផ្តើម និងការពង្រីកការចម្លងអុងកូហ្សែននៅក្នុងរោគវិទ្យានៃ TNBC។ នៅក្នុងការសិក្សាដ៏សំខាន់មួយ ការលុប CDK7 ដោយ CRISPR/Cas9 បានរារាំង TNBC ដែលបង្ហាញថារោគវិទ្យានៃ TNBC គឺពឹងផ្អែកលើ CDK7 (Wang Y. et al., 2015)។
ការសិក្សាបានបង្ហាញថា ការផ្លាស់ប្តូរហ្សែននៅក្នុង MYC និង RBP (ប្រូតេអ៊ីនភ្ជាប់ RNA) អាចនាំឱ្យមាន apoptosis ខណៈពេលដែលការផ្លាស់ប្តូរហ្សែនតែមួយនៅក្នុង MYC ឬ RBP មិនប៉ះពាល់ដល់ការលូតលាស់របស់កោសិកាមហារីកទេ (Einstein et al., 2021)។ RBP ជាង 1000 នៅក្នុងហ្សែនមនុស្សត្រូវបានត្រួតពិនិត្យដោយប្រើបណ្ណាល័យដែលមានមូលដ្ឋានលើ CRISPR/Cas9។ ក្នុងចំណោមនោះ RBP ចំនួន 57 ត្រូវបានគេរកឃើញថាមានសារៈសំខាន់សម្រាប់ការលូតលាស់របស់កោសិកាមហារីកដែលមានកម្រិត MYC ខ្ពស់ (Wheeler et al., 2020)។ លើសពីនេះ YTHDF2 គឺមានសារៈសំខាន់សម្រាប់ការរក្សាការលូតលាស់កោសិកា TNBC និងកាត់បន្ថយបរិមាណនៃប្រតិចារិកដែលមានមេទីលក្នុងអំឡុងពេលប្រតិចារិក និងការបកប្រែកម្រិតខ្ពស់នៅក្នុងកោសិកាមហារីកដែលមានការបញ្ចេញមតិ MYC ខ្ពស់។ លើសពីនេះ YTHDF2 មិនចាំបាច់សម្រាប់កោសិកាមហារីកទេ ដែលពឹងផ្អែកតិចលើកម្រិត MYC ខ្ពស់ដើម្បីពន្យារការរស់រានមានជីវិតរបស់អ្នកជំងឺ TNBC (Einstein et al., 2021) ដែលបង្ហាញថាវាអាចជាគោលដៅព្យាបាលដ៏មានសក្តានុពលសម្រាប់ថ្នាំដែលអាចយកឈ្នះ TNBC។
ប្រូតេអ៊ីនម្រាមដៃស័ង្កសី (ZNFs) បង្កើតបានប្រហែល 1% នៃហ្សែនមនុស្សសរុប។ ការសិក្សាបានបង្ហាញថា ZNF អាចគ្រប់គ្រងការរីកសាយកោសិកានៅក្នុងជំងឺមហារីកផ្សេងៗ ដូចជាជំងឺមហារីកថ្លើម ជំងឺមហារីកសុដន់ និងជំងឺមហារីកពោះវៀនធំ (Zhang W. et al., 2021; Li et al., 2017)។ បណ្ណាល័យដែលបង្កើតឡើងដោយ CRISPR knockout ត្រូវបានប្រើដើម្បីត្រួតពិនិត្យហ្សែនទប់ស្កាត់ដុំសាច់ (TSGs) ផ្សេងៗនៅក្នុងកោសិកាមហារីកសុដន់ (Shalem et al., 2014)។ ចាប់តាំងពីពេលនោះមក ការសិក្សាប្រតិចារិកនៃកោសិកាមហារីកសុដន់ដែលបានលុប ZNF319 ដោយប្រើ CRISPR/Cas9 បានបង្ហាញថា ZNF319 គឺជាហ្សែនទប់ស្កាត់ដុំសាច់ដែលកាត់បន្ថយការរីកសាយនៃជំងឺមហារីកសុដន់ ហើយដូច្នេះវាពាក់ព័ន្ធនឹងយន្តការផ្តល់សញ្ញាសក្តានុពលផ្សេងៗ និងមុខងារជីវសាស្រ្តផ្សេងទៀត (Wang L. et al., 2022)។
ហ្វឺរ៉ូបតូស៊ីស គឺជាប្រភេទនៃការស្លាប់កោសិកាដែលបានកំណត់កម្មវិធី ដែលអាស្រ័យលើវត្តមាននៃជាតិដែក។ វាត្រូវបានគេដឹងថា ការវិវត្តនៃហ្វឺរ៉ូបតូស៊ីស ត្រូវបានជះឥទ្ធិពលដោយវត្តមាននៃលីពីតប៉េរ៉ុកស៊ីត។ លើសពីនេះ PKCβII ត្រូវបានគេរាយការណ៍ថា បង្ហាញពីការកត់សុីលីពីតដំបូង ហើយការកត់សុីលីពីតកើនឡើង ត្រូវបានផ្សារភ្ជាប់ជាមួយនឹងហ្វឺរ៉ូបតូស៊ីស។ ការត្រួតពិនិត្យបណ្ណាល័យនៃសារធាតុទប់ស្កាត់គីណាសដែលសម្របសម្រួលដោយ CRISPR/Cas9 បានបង្ហាញថា PKCβII មានជាប់ពាក់ព័ន្ធនឹងដំណើរការនៃការកត់សុីលីពីត ដែលមានសារៈសំខាន់សម្រាប់ហ្វឺរ៉ូបតូស៊ីសនៅក្នុងកោសិកា MDA-MB-231 (Zhang et al., 2022)។ ដូច្នេះ នេះបង្ហាញថា ការកម្ចាត់ PKCβII ដោយ CRISPR/Cas9 អាចជាគោលដៅហ្សែនទប់ស្កាត់ដុំសាច់ដ៏មានសក្តានុពលសម្រាប់ការព្យាបាលជំងឺដែលទាក់ទងនឹងហ្វឺរ៉ូបតូស៊ីស (Zhang et al., 2022)។
ភាពធន់នឹងថ្នាំត្រូវបានគេជឿថាជាមូលហេតុនៃការស្លាប់ប្រហែល 90% ចំពោះអ្នកជំងឺមហារីក ហើយវាគឺជាបញ្ហាប្រឈមដ៏សំខាន់មួយក្នុងការព្យាបាលជំងឺមហារីក (Bukowski et al., 2020)។ លទ្ធផលបង្ហាញថា ចំនួនហ្សែនគ្រប់គ្រាន់ដែលទាក់ទងនឹងការបញ្ចេញថ្នាំ ការជួសជុល DNA ការស្លាប់កោសិកា និងផ្លូវបញ្ជូនសញ្ញាកោសិកាផ្សេងៗត្រូវបានផ្សារភ្ជាប់ជាមួយនឹងការធន់នឹងថ្នាំ (Haider et al., 2020)។ ក្នុងចំណោមនោះ ហ្សែនជាច្រើនត្រូវបានកំណត់គោលដៅដោយឧបករណ៍ CRISPR/Cas9 ហើយបានបង្ហាញលទ្ធផលដ៏ជោគជ័យក្នុងការកាត់បន្ថយភាពធន់នឹងថ្នាំ និងបង្កើនប្រសិទ្ធភាពនៃការព្យាបាលប្រឆាំងនឹងជំងឺមហារីក (Vaghari-Tabari et al., 2022)។ លើសពីនេះ បណ្ណាល័យត្រួតពិនិត្យការកម្ចាត់ហ្សែន CRISPR/Cas9 ដែលមានដំណើរការខ្ពស់ត្រូវបានចោទប្រកាន់ក្នុងការកែប្រែមុខងារនៃគោលដៅហ្សែនធន់នឹងថ្នាំដែលមានសក្តានុពល (Shalem et al., 2015)។ ដើម្បីកំណត់អត្តសញ្ញាណហ្សែនធន់នឹង paclitaxel ការធ្វើលំដាប់ RNA រួមផ្សំជាមួយនឹងការត្រួតពិនិត្យបណ្ណាល័យ sgRNA ទូទាំងហ្សែនត្រូវបានប្រើដើម្បីកំណត់អត្តសញ្ញាណហ្សែនបេក្ខជនចំនួនប្រាំបី រួមទាំង histone deacetylase 9 (HDAC9) ដែលជាប់ទាក់ទងនឹងភាពធន់នឹងថ្នាំចំពោះអ្នកជំងឺដែលមាន TNBC កើតឡើងវិញ (B et al., 2020)។ នៅក្នុងការសិក្សាមួយផ្សេងទៀត ការកើនឡើងនៃការបញ្ចេញមតិនៃ diserine/threonine និង tyrosine protein kinase (DSTYK) ត្រូវបានគេសង្កេតឃើញក្នុងអំឡុងពេលរស់រានមានជីវិតរបស់អ្នកជំងឺ TNBC ដែលត្រូវបានព្យាបាលដោយថ្នាំប្រឆាំងនឹងជំងឺមហារីក។ លើសពីនេះ ការបង្ក្រាប DSTYK ដែលសម្របសម្រួលដោយ CRISPR/Cas9 បានបង្កើន apoptosis នៃកោសិកាមហារីកដែលធន់នឹងថ្នាំនៅក្នុង vitro (កោសិកា SUM102PT និងកោសិកា MDA-MB-468) និងគំរូ TNBC ក្នុង vivo (Ogbu et al., 2021)។
ទោះបីជា TNBC មានការធ្វើឱ្យសកម្មមិនប្រក្រតីនៃផ្លូវ MAPK ក៏ដោយ ឥទ្ធិពលគ្លីនិកនៃការព្យាបាលដែលផ្តោតលើ MEK គឺខ្សោយ។ ការត្រួតពិនិត្យបណ្ណាល័យហ្សែន CRISPR/Cas9 បានបង្ហាញថា ការរារាំង PSMG2 (ការផ្គុំប្រូតេអូម chaperone 2) ធ្វើឱ្យកោសិកា TNBC BT549 និង MB468 ងាយនឹងប្រតិកម្មទៅនឹងសារធាតុទប់ស្កាត់ MEK AZD6244។ ការបំផ្លាញ CRISPR/Cas9 នៃ PSMG2 បានផ្លាស់ប្តូរមុខងារប្រូតេអូសូមធម្មតា ដែលនាំឱ្យមានការរុះរើ PDPK1 ដែលសម្របសម្រួលដោយ autophagy ដោយហេតុនេះធ្វើអោយប្រសើរឡើងបន្ថែមទៀតនូវកោសិកាដុំសាច់នៅក្នុងគំរូកណ្ដុរ TNBC ដែលបង្កឡើងដោយ AZD6244 (សារធាតុទប់ស្កាត់ MEK) និង MG132 (សារធាតុទប់ស្កាត់ប្រូតេអូសូម)។ ដូច្នេះ សារធាតុទប់ស្កាត់ proteasome និង MAP kinase (MEK) អាចត្រូវបានគ្រប់គ្រងរួមគ្នាដើម្បីកាត់បន្ថយការរីកសាយនៃកោសិកាដុំសាច់ (Wang X. et al., 2022)។
CRISPR/Cas9 ក៏ត្រូវបានគេប្រើដើម្បីតាមដានការបាត់បង់មុខងារហ្សែនដែលនាំឱ្យមានភាពធន់នឹង TNBC (Shu et al., 2020)។ Ge et al., 2020 បានពន្យល់ពីយន្តការនៃភាពធន់នឹងថ្នាំរបស់កោសិកាមហារីកដែលត្រូវបានព្យាបាលដោយ JQ1 ដែលជាសារធាតុទប់ស្កាត់ bromodomain BET (BBDI) នៅក្នុង TNBC។ ដោយប្រើ CRISPR/Cas9 ពួកគេបានរកឃើញថាការលុបហ្សែន rb1 បានបណ្តាលឱ្យ TNBC មានភាពធន់នឹងថ្នាំប្រឆាំងនឹងជំងឺមហារីក JQ1។ ដូច្នេះមុខងារ rb1 គឺមានសារៈសំខាន់ក្នុងការឆ្លើយតបទៅនឹងថ្នាំ JQ1 នៅក្នុង TNBC។ ពួកគេក៏បានរាយការណ៍ផងដែរថា paclitaxel គឺជាសារធាតុទប់ស្កាត់ CDK4/6 kinase/microtubule ហើយការរួមបញ្ចូលគ្នារបស់វាជាមួយ BBDIs ដូចជា JQ1 អាចផ្តល់នូវការឆ្លើយតបព្យាបាលដ៏ជោគជ័យចំពោះ TNBC ដែលធន់នឹងថ្នាំ (Ge et al., 2020)។
ទេសភាពប្រតិចារិកនៃ RNA ដែលមិនសរសេរកូដវែង (lncRNA) ត្រូវបានរាយការណ៍ថាទទួលខុសត្រូវចំពោះភាពធន់នឹងការព្យាបាល neoadjuvant នៅក្នុង TNBC។ ការសិក្សានេះបង្ហាញថា ប្រតិចារិក MALAT1 lncRNA ចំនួនប្រាំផ្សេងគ្នាត្រូវបានបង្ហាញយ៉ាងខ្លាំងនៅក្នុង TNBC។ លើសពីនេះ ការលុប MALAT1 ដែលសម្របសម្រួលដោយ CRISPR/Cas9 បានបង្កើនភាពរសើបនៃកោសិកា TNBC BT-549 ចំពោះ paclitaxel និង doxorubicin ដែលបង្ហាញពីតួនាទីដ៏មានសក្តានុពលសម្រាប់ភាពធន់នឹង MALAT1 នៅក្នុង TNBC (Shaath et al., 2021)។
ការផ្លាស់ប្តូរហ្សែននៅក្នុង BRCA1 (BRCA1m) មានលក្ខណៈមិនដូចគ្នា ហើយដូច្នេះពិបាករកឃើញ។ ការកំណត់គោលដៅ PARP1 (poly(ADP-ribose) polymerase) ដែលជាដៃគូសំយោគដ៏សាហាវរបស់ BRCA1 អាចបង្កើនភាពរសើបនៃថ្នាំ TNBC។ ដោយប្រើ CRISPR/Cas9 ការលុប PARP1 បានបង្កើនភាពរសើបនៃថ្នាំប្រឆាំងមហារីកដូចជា doxorubicin, gemcitabine និង docetaxel ទៅនឹងកោសិកា TNBC ដែលមានការផ្លាស់ប្តូរ mBRCA1 ដែលបង្ហាញថា PARP1 ក៏ពាក់ព័ន្ធនឹងភាពធន់នឹងថ្នាំនៅក្នុង TNBC ផងដែរ (Vaghari-Tabari et al., 2022)។ ការផ្លាស់ប្តូរហ្សែននៅក្នុងហ្សែនទប់ស្កាត់ដុំសាច់ BRCA1 ឬ BRCA2 ត្រូវបានគេដឹងថាបង្កើនលទ្ធភាពនៃការវិវត្តទៅជាជំងឺមហារីកសុដន់ចំពោះមនុស្ស។ ការព្យាបាលអ្នកជំងឺទាំងនេះតម្រូវឱ្យប្រើប្រាស់ថ្នាំទប់ស្កាត់ PARP។ លើសពីនេះ វាត្រូវបានបង្ហាញថា ការកម្ចាត់កត្តាសង្គ្រោះនុយក្លេអូទីត DNPH1 ដោយប្រើ CRISPR/Cas9 អាចយកនុយក្លេអូទីតពុល 5-hydroxymethyldeoxyuridine (hmdU) monophosphate ដោយហេតុនេះបង្កើនការឆ្លើយតបរបស់កោសិកាដែលខ្វះ BRCA ចំពោះភាពរសើបចំពោះថ្នាំទប់ស្កាត់ PARP (Fugger). et al., 2021)។ ដូច្នេះ ថ្នាំទប់ស្កាត់ CRISPR/Cas9 និង PARP1 អាចក្លាយជាយុទ្ធសាស្ត្រព្យាបាលដ៏សំខាន់សម្រាប់ TNBC។
ហ្សែន glycoprotein ជ្រាបចូល (P-gp) គឺជាហ្សែនធន់នឹងថ្នាំច្រើនមុខ ដែលជាទូទៅត្រូវបានធ្វើឱ្យកើនឡើងប្រហែល 41% នៃ TNBC ទាំងអស់ (Sun et al., 2020)។ ការហូរចេញថ្នាំដែលបង្កឡើងដោយ P-gp ត្រូវបានកំណត់ថាជានិយតករសំខាន់នៃភាពធន់នឹងថ្នាំនៅក្នុងជំងឺមហារីកសុដន់។ ថ្នាំទប់ស្កាត់ P-gp បានបង្ហាញពីភាពរសើបកាន់តែខ្លាំងចំពោះថ្នាំប្រឆាំងនឹងជំងឺមហារីកនៅក្នុងជំងឺមហារីកសុដន់ (Famta et al., 2021)។ ដូច្នេះ ការលុបបំបាត់ ឬការបង្ក្រាបថ្នាំទប់ស្កាត់ P-gp និង P-gp ដែលសម្របសម្រួលដោយ CRISPR/Cas9 អាចជាវិធីសាស្ត្រដ៏សំខាន់បំផុតដើម្បីយកឈ្នះលើភាពធន់នឹងថ្នាំនៅក្នុង TNBC។
អង់ស៊ីមដឹកជញ្ជូនកាសែតចងភ្ជាប់ ATP G2 (ABCG2) ត្រូវបានគេដឹងថាបណ្តាលឱ្យមានភាពធន់នឹងថ្នាំនៅក្នុង TNBC (Palasuberniam et al., 2015) ទោះបីជាបច្ចុប្បន្នមិនទាន់មានរបាយការណ៍អំពីទំនាក់ទំនងរវាង CRISPR/Cas9 និង ABCG2 ការបិទសំឡេង និងការធ្វើឱ្យហ្សែនទប់ស្កាត់ដុំសាច់អសកម្មក៏ដោយ។ PTEN អាចបង្កើនការធ្វើឱ្យសកម្ម ABCG2 (Palasuberniam et al., 2015), (Deepak Singh et al., 2021)។ ដូច្នេះ ការប្រើប្រាស់ CRISP/Ca9 ដើម្បីយក ABCG2 ចេញ ហើយផ្សំវាជាមួយនឹងសារធាតុទប់ស្កាត់ ABCG2 អាចជាការព្យាបាលសមស្របមួយដើម្បីយកឈ្នះលើភាពធន់នឹងថ្នាំនៅក្នុង TNBC។ តារាងទី 2 រៀបរាប់អំពី CRISPR/Cas9 ដែលកំណត់គោលដៅហ្សែនធន់ទ្រាំទាំងអស់។
តារាងទី 2. CRISPR/Cas9 កំណត់គោលដៅហ្សែនធន់នឹង TNBC ផ្សេងៗ ដើម្បីធ្វើឱ្យកោសិកាមានភាពរសើបចំពោះថ្នាំប្រឆាំងនឹងជំងឺមហារីក។
បណ្ណាល័យ CRISPR/Cas9 គឺជាឧបករណ៍ដែលមានសក្តានុពលសម្រាប់ការត្រួតពិនិត្យការផ្លាស់ប្តូរហ្សែនដែលទាក់ទងនឹងរោគវិទ្យាមហារីក (Chan et al., 2022)។ វិធីសាស្ត្រត្រួតពិនិត្យនេះពាក់ព័ន្ធនឹងជំហានចំនួនបួនដូចជា (ក) ការបង្កើតបណ្ណាល័យ (ខ) ការបញ្ជូនហ្សែន lentiviral (គ) ការត្រួតពិនិត្យ phenotypic និង (ឃ) ការវិភាគហ្សែនគោលដៅ។ ទោះបីជា TNBC មានការធ្វើឱ្យសកម្មមិនប្រក្រតីនៃផ្លូវ MAPK ក៏ដោយ ការព្យាករណ៍គ្លីនិកនៃការព្យាបាលគោលដៅ MEK សម្រាប់អ្នកជំងឺ TNBC ដែលមានការផ្លាស់ប្តូរនៅក្នុងហ្សែនទប់ស្កាត់ដុំសាច់ដូចជា PTEN, RB1 និង TP53 គឺខ្សោយណាស់។
លើសពីនេះ ការធ្វើតេស្តកម្ចាត់ហ្សែនដោយប្រើ CRISPR/Cas9 បានធ្វើតេស្តម៉ូលេគុលដ៏មានឥទ្ធិពល និងជ្រើសរើសបំផុត គឺ dehydrocatrol ដែលមានច្រើននៅក្នុងសារធាតុចម្រាញ់ពីផ្កា និងស្លឹកហ្គាតេម៉ាឡា ដើម្បីយល់ពីឥទ្ធិពលរបស់ dehydrocatrol លើ MDA-MB-231។ យន្តការនៃភាពពុលកោសិកាជ្រើសរើស។ លក្ខណៈដើមមេសេនឈីម៉ាល់នៃប្រភេទរង TNBC។ ការធ្វើតេស្តដែលមានមូលដ្ឋានលើ CRISPR/Cas9 នេះក៏បានបង្ហាញផងដែរថា HSD17B11 ដែលជាហ្សែនដែលអ៊ិនកូដ 17β-hydroxysteroid dehydrogenase ប្រភេទ 11 ត្រូវបានបង្ហាញយ៉ាងខ្លាំងនៅក្នុងកោសិកា MDA-MB-231 ហើយបណ្តាលឱ្យមាន dehydrofalcarinol ជាក់លាក់សម្រាប់កោសិកា MDA-MB-231 (Grant et. al., 2020)។ ដូច្នេះ នេះបង្ហាញថា ការត្រួតពិនិត្យហ្សែន CRISPR/Cas9 មានសក្តានុពលយ៉ាងខ្លាំងក្នុងការកំណត់អត្តសញ្ញាណយន្តការដែលស្ថិតនៅក្រោមលក្ខណៈសម្បត្តិប្រឆាំងមហារីកនៃសមាសធាតុធម្មជាតិដែលមានសក្តានុពល។
លើសពីនេះ ភាពងាយរងគ្រោះរបស់ TNBC ចំពោះជំងឺមហារីកត្រូវបានសិក្សាដោយប្រើអេក្រង់ CRISPR/Cas9 ដែលមិនលំអៀងទូទាំងហ្សែន ក្នុង vivo ដែលបង្ហាញពីទំនាក់ទំនងរវាងផ្លូវ oncogenic និងផ្លូវទប់ស្កាត់ដុំសាច់។ សមាសធាតុសំខាន់ៗនៃផ្លូវ mTOR និង Hippo ត្រូវបានរាយការណ៍ថាដើរតួនាទីយ៉ាងសំខាន់ក្នុងការគ្រប់គ្រងដុំសាច់នៅក្នុង TNBC។ លើសពីនេះ ការសិក្សាបានបង្ហាញថា ការរារាំងឱសថសាស្ត្រនៃ mTORC1/2 និង YAP oncoprotein រារាំងប្រសិទ្ធភាពនៃការបង្ករោគរបស់ TNBC ដោយប្រើគំរូសហការម៉ាទ្រីសថ្នាំក្នុងវីត្រូ និង xenografts ដែលទទួលបានពីអ្នកជំងឺក្នុង vivo។ លើសពីនេះ ការរារាំង mTORC1/2 ដែលសម្របសម្រួលដោយ Torin-1 បង្កើន macropinocytosis ខណៈពេលដែលការរារាំង YAP ដែលបង្កឡើងដោយ verteporfin នាំឱ្យស្លាប់កោសិកា TNBC។ សរុបមក លទ្ធផលទាំងនេះបង្ហាញពីអំណាច និងភាពរឹងមាំនៃអេក្រង់ CRISPR ក្នុង vivo ទូទាំងហ្សែន ដើម្បីកំណត់អត្តសញ្ញាណការព្យាបាលថ្មី និងមានប្រសិទ្ធភាពសម្រាប់ TNBC (Dai et al., 2021)។
ភាពមិនប្រក្រតីនៃប្រព័ន្ធភាពស៊ាំ គឺជាកត្តាសំខាន់មួយក្នុងការកើតដុំសាច់។ កោសិកាមហារីកគេចវេះការបោសសំអាតប្រព័ន្ធភាពស៊ាំ ដោយរំលងយន្តការការពារ រួមទាំងការរំខានដល់សកម្មភាពរបស់កោសិកាភាពស៊ាំនៅក្នុងមីក្រូបរិស្ថានដុំសាច់ និងធ្វើឱ្យប្រព័ន្ធភាពស៊ាំចុះខ្សោយ។ ដូច្នេះ ការអភិវឌ្ឍប្រព័ន្ធភាពស៊ាំដែលប្រសើរឡើង អាចជាវិធីសាស្រ្តសំខាន់មួយក្នុងការប្រយុទ្ធប្រឆាំងនឹងដុំសាច់។ ការប្រើប្រាស់ការកែប្រែហ្សែនដែលមានមូលដ្ឋានលើ CRISPR/Cas9 ដោះស្រាយបញ្ហាជាច្រើនដែលទាក់ទងនឹងមុខងារភាពស៊ាំមិនប្រក្រតីពីទស្សនៈផ្សេងៗគ្នា។ CRISPR/Cas9 ត្រូវបានប្រើដើម្បីកែលម្អភាពស៊ាំប្រឆាំងនឹងដុំសាច់ប្រឆាំងនឹងជំងឺមហារីកសុដន់តាមរយៈផ្លូវដូចខាងក្រោម (រូបភាពទី 3)។
រូបភាពទី 3. ការព្យាបាលដោយប្រព័ន្ធភាពស៊ាំ CRISPR/Cas9 ផ្តោតលើកោសិកា TNBC។ ការបាត់បង់ CDK5 និងការបំផ្លាញ PDL1 និង CD155 ជួយបង្កើនប្រព័ន្ធភាពស៊ាំ។ ដូចគ្នានេះដែរ ការបាត់បង់ A2AR និងការបំផ្លាញ TAAs ដូចជា HER2, mucin 1 និង TEM8 បានបង្កើនប្រសិទ្ធភាពនៃកោសិកា CAR-T ក្នុងការសម្លាប់កោសិកាមហារីក។ ការត្រួតពិនិត្យកោសិកា T ដែលជំរុញដោយ CRISPR/Cas9 បានបង្ហាញថា ការរំខានដល់ p38 kinase ជួយបង្កើនសកម្មភាពប្រឆាំងនឹងដុំសាច់របស់កោសិកា T។ កោសិកា T ដែលកែប្រែដោយ CRISPR/Cas9 បង្កើនការបញ្ចេញមតិរបស់ TCR (អ្នកទទួលកោសិកា T) ដែលបណ្តាលឱ្យកោសិកា T មានសកម្មភាពប្រឆាំងនឹងដុំសាច់។
គោលដៅនៃការព្យាបាលដោយប្រព័ន្ធភាពស៊ាំគឺដើម្បីជំរុញប្រព័ន្ធភាពស៊ាំឱ្យវាយប្រហារកោសិកាមហារីក។ ការបញ្ចេញមតិច្រើនពេកនៃប្រូតេអ៊ីនចំណុចត្រួតពិនិត្យភាពស៊ាំជាធម្មតាការពារប្រតិកម្មអូតូអ៊ុយមីន ប៉ុន្តែអាចជួយឱ្យជំងឺមហារីកជៀសវាងពួកវា (Topalian et al., 2015)។ ប្រូតេអ៊ីនទាំងនេះការពារប្រតិកម្មភាពស៊ាំដោយភ្ជាប់ទៅនឹងអង់ទីករនៅលើផ្ទៃនៃកោសិកាភាពស៊ាំ។ ប្រូតេអ៊ីនចំណុចត្រួតពិនិត្យច្រើន (ដូចជា CD155 និង PD-L1) កំណត់គោលដៅអង់ទីករ PD-1 លើកោសិកាភាពស៊ាំ ហើយត្រូវបានបង្ហាញនៅក្នុងជំងឺមហារីកសុដន់ ជាពិសេស TNBC (Li Y.-C. et al., 2020)។ ការបំផ្លាញ PD-L1 ឬអង់ទីកររបស់វាដោយប្រើ CRISPR/Cas9 អាចជំរុញប្រព័ន្ធភាពស៊ាំឱ្យវាយប្រហារដុំសាច់ TNBC (Yahata et al., 2019)។ លើសពីនេះ ការថយចុះនៃការបញ្ចេញមតិ PD-L1 តាមរយៈការលុប CDK5 ដែលសម្របសម្រួលដោយ CRISPR/Cas9 ត្រូវបានបង្ហាញថារារាំងការលូតលាស់ដុំសាច់នៅក្នុង vitro និងនៅក្នុង vivo (Deng et al., 2020)។ ការរារាំងការលូតលាស់នៅក្នុងគំរូ in vitro និង in vivo នៃជំងឺមហារីកសុដន់បង្ហាញថាការកាត់បន្ថយ CD155 ដែលសម្របសម្រួលដោយ shRNA អាចមានប្រសិទ្ធភាពព្យាបាលលើជំងឺមហារីកសុដន់ (Gao et al., 2018)។
កោសិកា T CAR បង្ហាញ CARs ដែលស្គាល់អង់ទីហ្សែនដែលទាក់ទងនឹងដុំសាច់ (TAAs) ហើយអាចប្រើការបំបែកប្រូតេអ៊ីនចំណុចត្រួតពិនិត្យដើម្បីបង្កើនសកម្មភាពរបស់វា (Li C. et al., 2020)។ មានគោលដៅសក្តានុពលជាច្រើនសម្រាប់ការព្យាបាលកោសិកា T CAR ក្នុងជំងឺមហារីកសុដន់ រួមទាំង TAAs ជាច្រើនដូចជា HER2, mucin1 និង TEM8 (Bajgain et al., 2018)។ មានភស្តុតាងដែលបង្ហាញថាកោសិកា T CAR ដែលកំណត់គោលដៅ mesothelin (ដែលបញ្ចេញច្រើនពេកនៅក្នុងកោសិកា TNBC BT-459) មានប្រសិទ្ធភាពជាងប្រឆាំងនឹងជំងឺមហារីកនៅពេលដែល PD-1 ត្រូវបានបំបែកចេញដោយប្រើ CRISPR/Cas9 (Hu et al., 2019)។ ទោះជាយ៉ាងណាក៏ដោយ ការញែកកោសិកា T ពីអ្នកជំងឺ ហើយបន្ទាប់មកកែសម្រួលពួកវា ex vivo គឺជាដំណើរការដែលប្រើកម្លាំងពលកម្មច្រើន និងចំណាយពេលច្រើន។ ទោះបីជាកោសិកា T ជាសកលអាចកាត់បន្ថយតម្រូវការញែកក៏ដោយ កោសិកា T អ្នកបរិច្ចាគដែលបង្ហាញអង់ទីហ្សែន leukocyte របស់មនុស្ស (HLA) ថ្នាក់ទី I និងឧបករណ៍ទទួលកោសិកា T (TCR) គួរតែត្រូវបានយកចេញដើម្បីការពារភាពមិនប្រក្រតីនៃការផ្សាំទល់នឹងម៉ាស៊ីន (Ren et al., 2017)។ , 2017a)។ ដោយប្រើប្រាស់ CRISPR/Cas9 បច្ចេកវិទ្យា HDR អាចលុបបំបាត់ TCR និង HLA ក្នុងពេលដំណាលគ្នា និងបំផ្លាញហ្សែនដែលអ៊ិនកូដ CAR។ ការសិក្សាបានបង្ហាញថា CRISPR/Cas9 អាចត្រូវបានប្រើដើម្បីណែនាំ anti-CD19 CARs ទៅក្នុងទីតាំង TCR ដោយហេតុនេះផលិត CARs ប្រកបដោយប្រសិទ្ធភាពដោយមិនធ្វើឱ្យកោសិកា T ថយចុះ (Dimitri et al., 2022)។ បច្ចេកវិទ្យា Multiplex ត្រូវបានបង្កើតឡើងដើម្បីបង្កើតកោសិកា CAR T allogeneic ដោយការលុបបំបាត់ TCR, beta-2-microglobulin (B2M), អនុឯកតា HLA-I និងប្រូតេអ៊ីនផ្សេងទៀតដូចជា PD-1 និង CTLA-4 ក្នុងពេលដំណាលគ្នា ដែលអាចមានលក្ខណៈសម្បត្តិប្រឆាំងនឹងជំងឺមហារីកកាន់តែច្រើនប្រឆាំងនឹង TNBC (Eyquem et al., 2017; Liu et al., 2017; Ren et al., 2017b; Dimitri et al., 2022)។
ការប្រើប្រាស់ CRISPR/Cas9 អាចបង្កើនប្រសិទ្ធភាពនៃកោសិកា CAR-T។ អាដេណូស៊ីនត្រូវបានគេដឹងថាមានលក្ខណៈសម្បត្តិបង្ក្រាបប្រព័ន្ធភាពស៊ាំ និងអាចកាត់បន្ថយភាពស៊ាំប្រឆាំងមហារីកដោយការរារាំងមុខងារកោសិកា T និងធ្វើឱ្យសកម្មនូវអង់ស៊ីមទទួលអាដេណូស៊ីន A2A (A2AR) (Vigano et al., 2019)។ ការបិទ A2AR ដោយប្រើ CRISPR/Cas9 បានធ្វើអោយប្រសើរឡើងយ៉ាងខ្លាំងនូវប្រសិទ្ធភាពនៃកោសិកា CAR-T នៅក្នុងខ្លួន (Giuffrida et al., 2021)។ កោសិកា T ត្រូវបានគេដឹងថាបង្ហាញលក្ខណៈ phenotypic ផ្សេងៗដូចជាការពង្រីកកោសិកា ភាពខុសគ្នា ភាពតានតឹងអុកស៊ីតកម្ម និងភាពតានតឹងហ្សែន។ ការត្រួតពិនិត្យកោសិកា T ដែលមានមូលដ្ឋានលើ CRISPR/Cas9 បានបង្ហាញពីការរំខានដល់ kinases ទទួលកោសិកា T ចំនួន 25 ផ្សេងគ្នា។ ក្នុងចំណោមនោះ ការលុប p38 kinase ត្រូវបានបង្ហាញថាបង្កើនសកម្មភាពប្រឆាំងនឹងដុំសាច់របស់កោសិកា T ដែលបង្ហាញថា p38 kinase គឺជានិយតករសំខាន់នៃបទប្បញ្ញត្តិកោសិកា CAR-T (Gurusamy et al., 2020)។
កោសិកា T អាចត្រូវបានកែប្រែហ្សែនដោយប្រើ CRISPR/Cas9 ដើម្បីផលិត TCR ដែលបង្ហាញការបញ្ចេញមតិខ្ពស់។ ការផ្ទេរកោសិកា T ដែលកែប្រែហ្សែនទៅអ្នកជំងឺបានបង្ហាញពីសកម្មភាពប្រឆាំងមហារីកខ្លាំងជាងកោសិកា T ដើម។ ដូច្នេះ TCR ដែលបង្កើតឡើងវិញអាចប្រកួតប្រជែងជាមួយ TCR ដែលកែប្រែហ្សែនចំពោះអ្នកជំងឺ ដែលអាចប៉ះពាល់ដល់សក្តានុពលនៃការព្យាបាលដោយប្រព័ន្ធភាពស៊ាំមហារីក។ ដើម្បីជំនះបញ្ហានេះ ការប្រើប្រាស់ CRISPR/Cas9 ដើម្បីយក TCR-β ដែលបង្កើតឡើងវិញនៅក្នុងកោសិកាអ្នកទទួល ហើយបន្ទាប់មកផ្ទេរកោសិកា T TCR-β ទៅអ្នកជំងឺមហារីកអាចបង្ហាញពីការឆ្លើយតបនៃប្រព័ន្ធភាពស៊ាំប្រឆាំងមហារីកបានល្អប្រសើរដោយមិនចាំបាច់មានការប្រកួតប្រជែងផ្លូវភេទ TCR ដែលបង្កើតឡើងវិញ (Fan et al. 2018)។ ដូច្នេះ លើកលែងតែកោសិកា T ដែលកែប្រែ CRISPR TCRs មានភាពរសើបចំពោះអង់ទីហ្សែនដុំសាច់ច្រើនជាងកោសិកា T ដែលប្តូរ TCR ធម្មតារាប់ពាន់ដង។ លើសពីនេះ នៅក្នុងជំងឺមហារីកឈាមផ្សេងៗ កោសិកា T ដែលកែប្រែដែលបង្កើតឡើងដោយ γδ TCR+ CRISPR បង្ហាញពីការបញ្ចេញមតិខ្ពស់ជាងនៃកោសិកា T CD4+ និង CD8+ ជាងការផ្ទេរ TCR ស្តង់ដារ (Legut et al., 2018)។ ដូច្នេះ កោសិកា T ដែលបានកែប្រែដែលបង្កើតឡើងដោយ CRISPR/Cas9 អាចជាវិធីសាស្ត្រព្យាបាលដោយប្រព័ន្ធភាពស៊ាំដ៏មានប្រសិទ្ធភាពដើម្បីយកឈ្នះលើ TNBC។
អ៊ីនតេហ្គ្រីន គឺជាម៉ូលេគុលស្អិតកោសិកា ដែលមានវត្តមាននៅក្នុងភ្នាសកោសិកា និងជំរុញការភ្ជាប់កោសិកាទៅនឹងម៉ាទ្រីសក្រៅកោសិកា (ECM) (Hamidi និង Ivaska, 2018)។ ការធ្វើនិយតកម្មនៃអ៊ីនតេហ្គ្រីន ត្រូវបានផ្សារភ្ជាប់ជាមួយនឹងការវិវត្ត និងការធ្វើចំណាកស្រុកនៃជំងឺមហារីក ដោយការផ្លាស់ប្តូរម៉ាទ្រីសក្រៅកោសិកា ដែលនាំឱ្យកោសិកាមហារីករស់រានមានជីវិតនៅក្នុងចរន្តឈាម (Hamidi និង Ivaska, 2018)។ ការបិទអ៊ីនតេហ្គ្រីនដែលសម្របសម្រួលដោយ CRISPR/Cas9 ធ្វើឱ្យការវិវត្តនៃដុំសាច់ ការរីករាលដាល និងការធ្វើអាណានិគមនៅក្នុង TNBC ថយចុះ។ ការបិទអ៊ីនតេហ្គ្រីន a5 (ITGA5) ត្រូវបានរាយការណ៍ថា កាត់បន្ថយការធ្វើចំណាកស្រុក និងវឌ្ឍនភាពនៃកោសិកានៅក្នុងជំងឺមហារីកដទៃទៀតដូចជាជំងឺមហារីកសួត (Ju et al., 2017) ដែលបង្ហាញថា អ៊ីនតេហ្គ្រីន a5 ក៏អាចជាកត្តាសំខាន់ក្នុងការវិវត្តនៃ TNBC ផងដែរ។
ការបង្កើតកណ្ដុរ knockout ដោយប្រើវិធីសាស្ត្រកោសិកាដើមអំប្រ៊ីយ៉ុងបែបប្រពៃណី (ES) គឺជាដំណើរការដែលប្រើកម្លាំងពលកម្មច្រើន ចំណាយពេលច្រើន និងគ្មានប្រសិទ្ធភាព។ វាត្រូវចំណាយពេលច្រើនខែ និងច្រើនឆ្នាំដើម្បីកំណត់គោលដៅកោសិកា ES តាមរយៈការបញ្ចូលគ្នាឡើងវិញដូចគ្នា បង្កាត់ពូជកណ្ដុរ chimeric ហើយបន្ទាប់មកបង្កាត់ពូជពួកវាជាមួយកណ្ដុរ heterozygous ដើម្បីបង្កើតកូនចៅ homozygous ។ ការបង្កាត់ពូជស្មុគស្មាញគឺត្រូវបានទាមទារដើម្បីបង្កើតកណ្ដុរដែលមានការផ្លាស់ប្តូរហ្សែនច្រើន។ ទោះជាយ៉ាងណាក៏ដោយ បញ្ហាជាច្រើនបានកើតឡើងនៅពេលប្រើកណ្ដុរដែលបង្កើតឡើងដោយការលុបបំបាត់កោសិកា ES ដោយប្រើ CRISPR/Cas9 ឬដោយការចាក់សមាសធាតុ CRISPR/Cas9 ទៅក្នុងស៊ុតដែលមានជីជាតិកោសិកាតែមួយ។ ឧទាហរណ៍ ការណែនាំអំពីការផ្លាស់ប្តូរជារឿយៗកើតឡើងនៅ loci biallelic ហើយមិនជាក់លាក់ចំពោះហ្សែនទេ។ ថ្មីៗនេះមានរបាយការណ៍ថាកោសិកា ES ដោយប្រើបច្ចេកវិទ្យា CRISPR/Cas9 អាចបញ្ចូលការផ្លាស់ប្តូរ biallelic ក្នុងពេលដំណាលគ្នានៅក្នុងហ្សែនរហូតដល់ 5 (Nishizono et al., 2021)។ ចំពោះគោលបំណងនេះ mRNA Cas9 និង gRNA ជាក់លាក់ចំពោះហ្សែនចំនួនប្រាំត្រូវបានបញ្ចូលទៅក្នុងកោសិកា ES ក្នុងពេលដំណាលគ្នា។ នេះបង្ហាញពីការសន្យា និងប្រសិទ្ធភាពនៃនីតិវិធីនេះ ទោះបីជាការផ្លាស់ប្តូរទាំងនេះអាចត្រូវបានបន្តនៅពេលដែលពូជពង្សស្ថាបនិកត្រូវបានបង្កាត់ពូជដើម្បីបង្កើតកណ្ដុរ knockout ចំនួនប្រាំក៏ដោយ។ ការសិក្សានេះក៏បានរាយការណ៍ពីការរកឃើញដ៏គួរឱ្យភ្ញាក់ផ្អើលមួយផងដែរ៖ កោសិកា ES លែងត្រូវបានទាមទារដើម្បីបង្កើតកណ្ដុរដែលបានកែប្រែហ្សែនទៀតហើយ។ ផ្ទុយទៅវិញ ដើម្បីយកផលិតផលហ្សែនជាក់លាក់ចេញ mRNA និង gRNA របស់ Cas9 ត្រូវបានចាក់ចូលទៅក្នុងអំប្រ៊ីយ៉ុងដំណាក់កាលកោសិកាតែមួយ។ ជាលទ្ធផល ពូជពង្សស្ថាបនិក knockout ត្រូវបានបង្កើតឡើង ដែលតាមទ្រឹស្តីអាចត្រូវបានប្រើដើម្បីសិក្សាពីផលវិបាកនៃការលុបហ្សែននៅក្នុងកណ្ដុរ (Qin et al., 2016)។ ដូច្នេះ CRISPR/Cas9 អនុញ្ញាតឱ្យបង្កើតកណ្ដុរ transgenic ដើម្បីព្យាបាល TNBC ក្នុងតម្លៃទាបជាងវិស្វកម្មហ្សែនប្រពៃណី។ ដោយប្រើប្រព័ន្ធ CRISPR/Cas គំរូកណ្ដុរ knockout ថ្មីមួយត្រូវបានបង្កើតឡើង ដែលអាចណែនាំការផ្លាស់ប្តូរចំណុចដោយជោគជ័យនៅក្នុងហ្សែន endogenous មួយ ឬច្រើននៅក្នុង TNBC។ ដោយផ្អែកលើគោលគំនិតនេះ គំរូសត្វនៃ TNBC ក៏អាចត្រូវបានបង្កើតឡើងដោយប្រើការលុប BRCA1 និង p53 ដែលសម្របសម្រួលដោយ CRISPR/Cas9 ដែលបណ្តាលឱ្យបាត់បង់ការជួសជុល HR អស្ថិរភាពហ្សែន និង phenotypes ដែលមានការផ្លាស់ប្តូរ (Annunziato et al., 2020)។
បច្ចុប្បន្ននេះ វិធីសាស្រ្តផ្សេងៗដូចជា ការថតម៉ាម៉ូក្រាម ការថតរូបភាពអនុភាពម៉ាញេទិក (MRI) និងអ៊ុលត្រាសោន ត្រូវបានប្រើដើម្បីធ្វើរោគវិនិច្ឆ័យ TNBC។ ទោះជាយ៉ាងណាក៏ដោយ វិធីសាស្រ្តទាំងនេះមានដែនកំណត់មួយចំនួន។ ការថតម៉ាម៉ូក្រាម ត្រូវបានប្រើដើម្បីធ្វើរោគវិនិច្ឆ័យជាលិកាសុដន់ក្នុងតំបន់ ជាជាងការរាលដាល ដែលកោសិកាមហារីកបានធ្វើចំណាកស្រុកទៅសរីរាង្គផ្សេងទៀត។ ការថតអ៊ុលត្រាសោន មិនមែនជាវិធីសាស្រ្តដែលអាចទុកចិត្តបានសម្រាប់ការធ្វើរោគវិនិច្ឆ័យ TNBC នោះទេ (Chen និង Lee-Felker, 2023)។ MRI មានភាពរសើបខ្ពស់ជាងអ៊ុលត្រាសោន និងការថតម៉ាម៉ូក្រាម ប៉ុន្តែភាពត្រឹមត្រូវនៃការធ្វើរោគវិនិច្ឆ័យរបស់វាមានកម្រិត (Sha និង Chen, 2022)។ ការធ្វើកោសល្យវិច័យជាលិកា គឺជាវិធីសាស្រ្តឈ្លានពានមួយ ដើម្បីកំណត់អត្តសញ្ញាណកោសិកាមហារីក។ ទោះជាយ៉ាងណាក៏ដោយ ក្នុងករណីខ្លះ ការធ្វើកោសល្យវិច័យអាចខកខានជាលិកាមហារីក ប្រសិនបើម្ជុលវង្វេងចេញពីតំបន់ដែលចាប់អារម្មណ៍។ លើសពីនេះ វាមានតម្លៃថ្លៃណាស់ ហើយអាចបង្ករបួសដល់អ្នកជំងឺ។ TNBC គឺជាប្រភេទមហារីកដែលមានភាពខុសប្លែកគ្នា ដូច្នេះការធ្វើកោសល្យវិច័យអាចមិនផ្តល់ព័ត៌មានគ្រប់គ្រាន់អំពីប្រភេទនៃជំងឺមហារីកនោះទេ។ ដូច្នេះ វិធីសាស្រ្តថ្មីដែលអាចទុកចិត្តបានក្នុងការធ្វើរោគវិនិច្ឆ័យ សម្រាប់ការរកឃើញ TNBC គឺត្រូវការជាបន្ទាន់។ CRISPR/Cas9 អាចបម្រើជាជម្រើសដ៏រសើបខ្ពស់ និងមានការឈ្លានពានតិចតួចបំផុតសម្រាប់ការធ្វើរោគវិនិច្ឆ័យជំងឺមហារីកសុដន់។ ចំពោះគោលបំណងនេះ យុទ្ធសាស្ត្រដែលមានមូលដ្ឋានលើ CRISPR/Cas9 អាចត្រូវបានប្រើដើម្បីកែលម្អវិធីសាស្ត្រ PCR សម្រាប់ការធ្វើរោគវិនិច្ឆ័យ TNBC។ ដំបូង ប្រូតេអ៊ីន Cas9 និង cpf1 នៃប្រព័ន្ធ CRISPR ត្រូវបានប្រើដើម្បីយក DNA មិនជាក់លាក់ចេញ ហើយបន្ទាប់មកប្រូតេអ៊ីនទាំងពីរនេះ (Cas9 និង cpf1) អាចស្គាល់លំដាប់ PAM មុនពេលភ្ជាប់ទៅនឹង DNA គោលដៅ (Deepak Singh et al., 2021)។ ដូច្នេះ PCR អាចកំណត់អត្តសញ្ញាណការផ្លាស់ប្តូរដែលទាក់ទងនឹងការវិវត្តនៃជំងឺមហារីក។ ការសិក្សាជាច្រើនបានអនុម័តយុទ្ធសាស្ត្រដែលមានមូលដ្ឋានលើ CRISPR នេះដើម្បីរកឃើញការផ្លាស់ប្តូរផ្សេងៗគ្នានៅក្នុងជំងឺមហារីកផ្សេងៗគ្នា (Safari et al., 2019)។ ដូច្នេះ វិធីសាស្ត្រ PCR ដែលមានមូលដ្ឋានលើ CRISPR អាចកាត់បន្ថយការពឹងផ្អែកនៃការធ្វើរោគវិនិច្ឆ័យ TNBC លើវិធីសាស្ត្រឈ្លានពានដូចជា immunohistochemistry ដែលមានមូលដ្ឋានលើការធ្វើកោសល្យវិច័យ។
ការផ្លាស់ប្តូរហ្សែននៅក្នុងបទប្បញ្ញត្តិនៃអ្នកទទួលអរម៉ូនក៏ត្រូវបានបង្ហាញនៅក្នុង TNBC ផងដែរ (Chen និង Russo, 2009)។ យុទ្ធសាស្ត្រ PCR ដែលមានមូលដ្ឋានលើ CRISPR/Cas9 ដោយប្រើមីក្រូអារេសម្រាប់ការធ្វើរោគវិនិច្ឆ័យនៅចំណុចថែទាំអាចតាមដានការផ្លាស់ប្តូរទាំងនេះប្រកបដោយប្រសិទ្ធភាព (Hajian et al., 2019)។ វាក៏អាចផ្តល់ឱ្យអ្នកផ្តល់សេវាថែទាំសុខភាពនូវព័ត៌មានពាក់ព័ន្ធអំពីការផ្លាស់ប្តូរជាក់លាក់ចំពោះអ្នកជំងឺ TNBC ដែលអាចជួយកែលម្អដំណើរការព្យាបាលរបស់ពួកគេ។ ទោះជាយ៉ាងណាក៏ដោយ បច្ចេកទេសរួមបញ្ចូលគ្នានេះមានដែនកំណត់។ ដូច្នេះ កិច្ចខិតខំប្រឹងប្រែងស្រាវជ្រាវយ៉ាងទូលំទូលាយគឺត្រូវបានទាមទារមុនពេលវិធីសាស្ត្រ CRISPR/Cas-PCR នេះអាចត្រូវបានប្រើក្នុងការថែទាំសុខភាពសម្រាប់ការធ្វើរោគវិនិច្ឆ័យ TNBC (Yang et al., 2019)។
ពេលវេលាបង្ហោះ៖ ថ្ងៃទី ១៤ ខែតុលា ឆ្នាំ ២០២៤